| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 前言 | 第11-14页 |
| 第一章 人的类硫氧化还原蛋白全长及其N端催化结构域的亚克隆、表达、纯化和结晶 | 第14-33页 |
| 一、材料与方法 | 第14-19页 |
| ·hTRXL的克隆重组 | 第14-16页 |
| ·质粒转化与扩增 | 第14页 |
| ·外源DNA及pGEX-4T-3载体的酶切 | 第14-15页 |
| ·pGEX-4T-3载体的去磷酸化处理 | 第15页 |
| ·体外连接反应 | 第15-16页 |
| ·重组克隆的筛选及SDS-PAGE电泳 | 第16-17页 |
| ·诱导表达 | 第16-17页 |
| ·SDS-PAGE蛋白电泳鉴定 | 第17页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第17-18页 |
| ·细胞抽提物的制备 | 第17页 |
| ·亲和柱层析 | 第17-18页 |
| ·分子筛及离子交换柱层析 | 第18页 |
| ·胰岛素还原酶活性测定 | 第18页 |
| ·hTRXL-N及hTRXL全长的晶体生长 | 第18-19页 |
| 二、结果与讨论 | 第19-33页 |
| ·hTRXL全长cDNA序列分析及同源性比对 | 第19-24页 |
| ·hTRXL表达体系的构建及重组克隆的筛选 | 第24页 |
| ·重组蛋白的纯化及检测 | 第24-27页 |
| ·hTRXL全长蛋白及各部分结构域的胰岛素还原酶活性测定 | 第27-28页 |
| ·hTRXL-N晶体的生长 | 第28页 |
| ·讨论 | 第28-33页 |
| 第二章 人的类硫氧化还原蛋白N端催化结构域晶体结构 | 第33-63页 |
| 一、结构解析原理介绍&分子置换法原理 | 第33-44页 |
| ·结构解析基本原理 | 第33-34页 |
| ·多对同晶置换法 | 第34-35页 |
| ·多波长反常散射法 | 第35-37页 |
| ·同晶差值法 | 第37-39页 |
| ·分子置换法原理 | 第39-41页 |
| ·旋转函数 | 第40-41页 |
| ·平移函数 | 第41页 |
| ·结构修正原理和方法 | 第41-44页 |
| 二、人的类硫氧化还原蛋白N端催化结构域单斜晶型结构的解析 | 第44-52页 |
| ·hTRXL-N晶体衍射的数据收集与处理 | 第44-49页 |
| ·hTRXL-N晶体的分子置换法研究 | 第49-51页 |
| ·旋转函数和平移函数的求解 | 第49-50页 |
| ·结果的检测 | 第50-51页 |
| ·hTRXL-N晶体结构的结构修正 | 第51-52页 |
| ·利用晶体衍射数据进行结构的优化 | 第51-52页 |
| ·残基二面角分布图 | 第52页 |
| 三、hTRXL-N结构的描述及相关生物学功能的分析 | 第52-63页 |
| ·hTRXL-N的整体结构的描述 | 第52-54页 |
| ·活性中心结构的分析 | 第54-57页 |
| ·酶的特异性的讨论 | 第57-59页 |
| ·hTRXL-N的单体结构的讨论 | 第59-63页 |
| 参考文献 | 第63-67页 |
| 综述 蛋白质结构预测的方法应用及类硫氧还蛋白C端结构域的结构预测 | 第67-86页 |
| 已经或即将的发表论文 | 第86-88页 |
| 致谢 | 第88页 |
