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草莓CHS基因分离、克隆和病毒诱导基因沉默(VIGS)载体构建

摘要第1-10页
Abstract第10-12页
第一章 文献综述第12-21页
 1 草莓概述第12-13页
   ·草莓果实的营养价值第12-13页
   ·草莓的经济意义第13页
 2 VIGS 概述第13-18页
   ·VIGS 的机理及途径第13-14页
   ·VIGS 的优越性第14-15页
   ·VIGS 的局限性第15-16页
   ·VIGS 载体构建、侵染、检测第16-17页
     ·VIGS 载体构建考虑因素第16页
     ·VIGS 侵染植物的方法第16-17页
     ·检测 VIGS 的方法第17页
   ·VIGS 的应用第17-18页
     ·在研究植物基因功能上的应用第17-18页
     ·在研究植物抗病毒上的应用第18页
   ·VIGS 的发展前景第18页
 3 克隆 CHS(查尔酮合成酶)基因的重要性第18-19页
 4 本研究的立题意义及主要内容第19-21页
   ·立题意义第19页
   ·研究内容第19-21页
第二章 草莓 CHS 基因的分离及生物信息学分析第21-34页
 1 草莓 CHS 基因的筛选、分离第21-23页
 2 草莓 FACHS1 基因的生物信息学分析第23-28页
   ·草莓 FACHS1 基因编码蛋白一级结构分析第23-24页
   ·草莓 FACHS1 基因编码蛋白结构分析第24页
   ·草莓 FACHS1 同源性分析与序列比对第24-26页
   ·草莓 FACHS1 编码蛋白亲水性分析第26-27页
   ·草莓 FACHS1 编码蛋白二级结构预测及跨膜结构分析第27-28页
 3 草莓 FACHS2 基因的生物信息学分析第28-32页
   ·草莓 FACHS2 基因编码蛋白一级结构分析第28页
   ·草莓 FACHS2 基因编码蛋白结构分析第28-29页
   ·草莓 FACHS2 同源性分析与序列比对第29-30页
   ·草莓 FACHS2 编码蛋白亲水性分析第30-31页
   ·草莓 FACHS2 编码蛋白二级结构预测及跨膜结构分析第31-32页
 4 小结第32-34页
第三章 草莓 CHS 基因的克隆第34-50页
 1 材料与试剂第34-36页
   ·试验材料第34页
   ·酶、试剂、菌种、培养基第34-35页
     ·酶和试剂第34页
     ·菌种和质粒第34页
     ·培养基及配制的试剂第34-35页
   ·主要仪器第35-36页
 2 实验方法第36-43页
   ·草莓 RNA 提取第36页
   ·CDNA 的合成第36-38页
     ·DNAase 消化第36-37页
     ·逆转录第37页
     ·内标基因检测模板 cDNA第37-38页
   ·引物设计与合成第38页
   ·PCR 扩增第38-39页
   ·PCR 扩增产物回收第39-40页
   ·回收 DNA 目的片段与 PUCM-T 载体的连接第40页
   ·大肠杆菌感受态细胞的制备第40-41页
   ·连接产物的转化第41页
   ·挑菌、克隆鉴定、保菌第41-42页
     ·挑菌第41页
     ·目的克隆鉴定第41-42页
     ·保菌第42页
   ·质粒的抽提第42-43页
   ·质粒验证第43页
   ·克隆测序及序列比对分析第43页
 3 结果与分析第43-47页
   ·草莓 RNA 的提取及内标基因检测 CDNA 模板第43-44页
   ·PCR 扩增及扩增产物回收第44页
   ·克隆鉴定及质粒鉴定第44-46页
   ·克隆测序与序列比对分析第46-47页
 4 小结第47-50页
   ·草莓 RNA 的提取第47-48页
   ·关于 PCR 反应第48页
   ·关于草莓 CHS 基因第48-50页
第四章 VIGS 载体构建第50-60页
 1 材料与试剂第50页
   ·材料第50页
   ·生物试剂第50页
   ·主要仪器第50页
   ·主要培养基和试剂第50页
 2 实验方法第50-55页
   ·质粒和 PTRV2 酶切第50-51页
   ·质粒和 PTRV2 酶切后切胶回收第51-52页
   ·过夜连接第52页
   ·CACL2法制备感受态第52页
   ·连接产物的转化第52-53页
   ·克隆鉴定第53页
   ·质粒的抽提第53-54页
   ·质粒验证第54页
   ·农杆菌感受态的制备第54-55页
   ·冻融法转化第55页
   ·农杆菌转化克隆鉴定第55页
 3 结果与分析第55-58页
   ·克隆鉴定第55-56页
   ·质粒鉴定第56页
   ·病毒载体的构建第56-57页
   ·农杆菌转化克隆鉴定第57-58页
 4 小结第58-60页
第五章 总结与展望第60-61页
参考文献第61-67页
缩略词表第67-68页
致谢第68页

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