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壳聚糖衍生物非病毒基因载体的研究

中文摘要第1-5页
Abstract第5-12页
第一章 绪论第12-36页
   ·引言第12-25页
     ·基因治疗的概念第12页
     ·基因治疗的历史回顾及我国的研究现状第12-14页
     ·基因治疗的途径第14页
     ·基因治疗的策略第14-15页
     ·基因治疗的步骤第15-17页
     ·基因转运递送过程第17-21页
       ·转运递送过程的障碍第17-19页
       ·基因转染过程中复合物跨越各道障碍的可能方法和途径第19-21页
     ·基因治疗的应用第21-23页
     ·基因治疗中有待解决的关键问题第23-24页
     ·理想载体的特征第24-25页
   ·非病毒载体第25-32页
     ·裸DNA第25-26页
     ·脂质体第26-28页
     ·聚合物第28-29页
       ·聚L-赖氨酸第28-29页
       ·聚乙烯亚胺(polyethylenimine, PEI)第29页
       ·树状聚合物第29页
       ·明胶第29页
     ·其它聚合物第29-30页
     ·复合载体第30-31页
       ·脂质复合物第30页
       ·拟病毒颗粒第30-31页
     ·基于抗体的靶向基因传递系统第31-32页
   ·壳聚糖非病毒载体第32-34页
   ·论文工作的提出第34-36页
第二章 精氨酸修饰壳聚糖的制备及其与DNA相互作用的研究第36-48页
   ·引言第36页
   ·实验部分第36-40页
     ·原料与仪器第36-37页
       ·原料第36-37页
       ·仪器第37页
     ·精氨酸修饰的壳聚糖缀合物的制备第37-38页
     ·精氨酸修饰的壳聚糖/DNA纳米复合物的制备第38-39页
     ·材料的表征第39-40页
       ·红外光谱分析(FTIR)第39页
       ·~(13)C核磁共振分析(NMR)第39页
       ·凝胶电泳阻滞实验(Gel Retardation Assay)第39页
       ·光子相关光谱分析(PCS)第39页
       ·透射电镜观察(TEM)第39页
       ·原子力显微镜观察(AFM)第39-40页
       ·圆二色谱分析(CD)第40页
   ·结果与讨论第40-47页
     ·红外光谱分析第40-41页
     ·~(13)C核磁共振分析第41-42页
     ·凝胶电泳阻滞实验分析第42-43页
     ·光子相关光谱分析第43-45页
     ·透射电镜观察第45页
     ·原子力显微镜观察第45-46页
     ·圆二色谱分析第46-47页
   ·结论第47-48页
第三章 精氨酸修饰的壳聚糖介导基因转染的实验研究第48-63页
   ·引言第48页
   ·实验部分第48-57页
     ·原料与仪器第48-49页
       ·原料第48-49页
       ·仪器第49页
     ·质粒的图谱第49-50页
     ·质粒DNA的提取第50-51页
       ·质粒DNA的小量提取第50页
       ·质粒DNA的大量提取第50-51页
     ·平滑肌细胞的培养第51-55页
       ·培养液的准备第51-52页
       ·血管平滑肌原代细胞的组织块培养第52-54页
       ·血管平滑肌细胞的培养第54-55页
     ·Lipofectamine试剂介导pIRES2-EGFP质粒体外转染平滑肌细胞第55-56页
     ·精氨酸修饰的壳聚糖介导pIRES2-EGFP质粒体外转染平滑肌细胞第56页
     ·精氨酸修饰的壳聚糖及其复合物对HeLa细胞的细胞毒性评价第56页
     ·精氨酸修饰的壳聚糖转染荧光素酶质粒的实验研究第56-57页
   ·结果与讨论第57-62页
     ·Lipofectamine试剂介导pIRES2-EGFP质粒体外转染平滑肌细胞第57页
     ·精氨酸修饰的壳聚糖介导pIRES2-EGFP质粒体外转染平滑肌细胞第57-58页
     ·精氨酸修饰的壳聚糖细胞毒性实验第58-60页
     ·精氨酸修饰的壳聚糖荧光素酶转染实验第60-62页
   ·结论第62-63页
第四章 N-亚甲基磷酸化壳聚糖的制备及其与DNA相互作用的研究第63-75页
   ·引言第63页
   ·实验部分第63-66页
     ·原料与仪器第63-64页
       ·原料第63-64页
       ·仪器第64页
     ·磷酸化壳聚糖(NPCS)的制备第64页
     ·红外光谱(FTIR)分析第64-65页
     ·~(13)C核磁共振分析(NMR)第65页
     ·N-亚甲基磷酸化修饰的壳聚糖NMPCS/DNA纳米复合物的制备第65页
     ·凝胶电泳阻滞实验(Gel Retardation Assay)第65页
     ·激光粒度分析仪第65-66页
     ·透射电镜观察(TEM)第66页
     ·原子力显微镜观察(AFM)第66页
     ·圆二色谱分析(CD)第66页
   ·结果与讨论第66-74页
     ·红外光谱(FTIR)分析第66-67页
     ·核磁共振分析(NMR)第67-68页
     ·凝胶电泳阻滞实验第68-69页
     ·透射电镜观察结果分析第69-70页
     ·激光粒度分析仪测试复合物粒径第70-71页
     ·原子力显微镜观察(AFM)第71-73页
     ·圆二色谱分析(CD)第73-74页
   ·结论第74-75页
第五章 N-亚甲基磷酸化壳聚糖介导基因转染的研究第75-84页
   ·引言第75页
   ·实验部分第75-78页
     ·原料与仪器第75-76页
       ·原料第75-76页
       ·仪器第76页
     ·菌体的培养及质粒的提取纯化第76页
     ·转染细胞的准备第76-77页
     ·亚甲基磷酸化壳聚糖及其复合物对HeLa细胞的细胞毒性评价第77页
     ·亚甲基磷酸化壳聚糖转染荧光素酶质粒的实验研究第77页
     ·亚甲基磷酸化壳聚糖盐型NMPCS-Ca/DNA复合物制备及转染研究第77-78页
   ·结果与讨论第78-83页
     ·细胞毒性分析第78-79页
     ·NMPCS/DNA复合物基因转染实验结果第79-82页
     ·聚合物-无机盐型NMPCS-Ca/DNA复合物转染结果第82-83页
   ·结论第83-84页
第六章 壳聚糖基非病毒载体荧光标记的研究第84-93页
   ·引言第84页
   ·实验部分第84-87页
     ·原料与仪器第84-85页
       ·原料第84页
       ·仪器第84-85页
     ·壳聚糖的FITC标记第85页
     ·质粒DNA的荧光修饰第85页
     ·标记效率的测定第85-86页
     ·质粒DNA的提取和壳聚糖载基因纳米粒子的制备第86页
     ·壳聚糖载基因纳米粒子的表征检测第86页
     ·CNP体外细胞转染实验第86页
     ·纳米粒子细胞内分布的初步研究第86页
     ·统计学处理第86-87页
   ·结果与讨论第87-92页
     ·壳聚糖的荧光修饰第87-88页
     ·反应温度对标记效率的影响第88页
     ·凝胶电泳阻滞实验第88-89页
     ·壳聚糖载基因纳米粒子体外细胞转染实验第89页
     ·激光共聚焦显微镜观察第89-92页
   ·结论第92-93页
第七章 精氨酸修饰壳聚糖载基因血管支架的研究第93-101页
   ·引言第93页
   ·实验部分第93-96页
     ·原料与仪器第93-94页
       ·原料第93-94页
       ·仪器第94页
     ·精氨酸修饰壳聚糖质粒DNA纳米粒子(ACDNPs)的制备及表征第94页
     ·精氨酸修饰壳聚糖基因支架的制备第94-95页
     ·技术路线第95页
     ·精氨酸修饰壳聚糖基因支架细胞基因转染实验第95-96页
     ·精氨酸修饰壳聚糖基因支架兔颈动脉植入实验第96页
   ·结果与讨论第96-100页
     ·ACDNPs支架扫描电镜观察第96-97页
     ·精氨酸修饰壳聚糖基因支架细胞基因转染实验第97-98页
     ·精氨酸修饰壳聚糖基因支架兔颈动脉植入实验第98-100页
   ·结论第100-101页
全文主要结论第101-103页
参考文献第103-112页
攻读博士学位期间完成的论文第112-113页
致谢第113页

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