中文摘要 | 第1-5页 |
Abstract | 第5-12页 |
第一章 绪论 | 第12-36页 |
·引言 | 第12-25页 |
·基因治疗的概念 | 第12页 |
·基因治疗的历史回顾及我国的研究现状 | 第12-14页 |
·基因治疗的途径 | 第14页 |
·基因治疗的策略 | 第14-15页 |
·基因治疗的步骤 | 第15-17页 |
·基因转运递送过程 | 第17-21页 |
·转运递送过程的障碍 | 第17-19页 |
·基因转染过程中复合物跨越各道障碍的可能方法和途径 | 第19-21页 |
·基因治疗的应用 | 第21-23页 |
·基因治疗中有待解决的关键问题 | 第23-24页 |
·理想载体的特征 | 第24-25页 |
·非病毒载体 | 第25-32页 |
·裸DNA | 第25-26页 |
·脂质体 | 第26-28页 |
·聚合物 | 第28-29页 |
·聚L-赖氨酸 | 第28-29页 |
·聚乙烯亚胺(polyethylenimine, PEI) | 第29页 |
·树状聚合物 | 第29页 |
·明胶 | 第29页 |
·其它聚合物 | 第29-30页 |
·复合载体 | 第30-31页 |
·脂质复合物 | 第30页 |
·拟病毒颗粒 | 第30-31页 |
·基于抗体的靶向基因传递系统 | 第31-32页 |
·壳聚糖非病毒载体 | 第32-34页 |
·论文工作的提出 | 第34-36页 |
第二章 精氨酸修饰壳聚糖的制备及其与DNA相互作用的研究 | 第36-48页 |
·引言 | 第36页 |
·实验部分 | 第36-40页 |
·原料与仪器 | 第36-37页 |
·原料 | 第36-37页 |
·仪器 | 第37页 |
·精氨酸修饰的壳聚糖缀合物的制备 | 第37-38页 |
·精氨酸修饰的壳聚糖/DNA纳米复合物的制备 | 第38-39页 |
·材料的表征 | 第39-40页 |
·红外光谱分析(FTIR) | 第39页 |
·~(13)C核磁共振分析(NMR) | 第39页 |
·凝胶电泳阻滞实验(Gel Retardation Assay) | 第39页 |
·光子相关光谱分析(PCS) | 第39页 |
·透射电镜观察(TEM) | 第39页 |
·原子力显微镜观察(AFM) | 第39-40页 |
·圆二色谱分析(CD) | 第40页 |
·结果与讨论 | 第40-47页 |
·红外光谱分析 | 第40-41页 |
·~(13)C核磁共振分析 | 第41-42页 |
·凝胶电泳阻滞实验分析 | 第42-43页 |
·光子相关光谱分析 | 第43-45页 |
·透射电镜观察 | 第45页 |
·原子力显微镜观察 | 第45-46页 |
·圆二色谱分析 | 第46-47页 |
·结论 | 第47-48页 |
第三章 精氨酸修饰的壳聚糖介导基因转染的实验研究 | 第48-63页 |
·引言 | 第48页 |
·实验部分 | 第48-57页 |
·原料与仪器 | 第48-49页 |
·原料 | 第48-49页 |
·仪器 | 第49页 |
·质粒的图谱 | 第49-50页 |
·质粒DNA的提取 | 第50-51页 |
·质粒DNA的小量提取 | 第50页 |
·质粒DNA的大量提取 | 第50-51页 |
·平滑肌细胞的培养 | 第51-55页 |
·培养液的准备 | 第51-52页 |
·血管平滑肌原代细胞的组织块培养 | 第52-54页 |
·血管平滑肌细胞的培养 | 第54-55页 |
·Lipofectamine试剂介导pIRES2-EGFP质粒体外转染平滑肌细胞 | 第55-56页 |
·精氨酸修饰的壳聚糖介导pIRES2-EGFP质粒体外转染平滑肌细胞 | 第56页 |
·精氨酸修饰的壳聚糖及其复合物对HeLa细胞的细胞毒性评价 | 第56页 |
·精氨酸修饰的壳聚糖转染荧光素酶质粒的实验研究 | 第56-57页 |
·结果与讨论 | 第57-62页 |
·Lipofectamine试剂介导pIRES2-EGFP质粒体外转染平滑肌细胞 | 第57页 |
·精氨酸修饰的壳聚糖介导pIRES2-EGFP质粒体外转染平滑肌细胞 | 第57-58页 |
·精氨酸修饰的壳聚糖细胞毒性实验 | 第58-60页 |
·精氨酸修饰的壳聚糖荧光素酶转染实验 | 第60-62页 |
·结论 | 第62-63页 |
第四章 N-亚甲基磷酸化壳聚糖的制备及其与DNA相互作用的研究 | 第63-75页 |
·引言 | 第63页 |
·实验部分 | 第63-66页 |
·原料与仪器 | 第63-64页 |
·原料 | 第63-64页 |
·仪器 | 第64页 |
·磷酸化壳聚糖(NPCS)的制备 | 第64页 |
·红外光谱(FTIR)分析 | 第64-65页 |
·~(13)C核磁共振分析(NMR) | 第65页 |
·N-亚甲基磷酸化修饰的壳聚糖NMPCS/DNA纳米复合物的制备 | 第65页 |
·凝胶电泳阻滞实验(Gel Retardation Assay) | 第65页 |
·激光粒度分析仪 | 第65-66页 |
·透射电镜观察(TEM) | 第66页 |
·原子力显微镜观察(AFM) | 第66页 |
·圆二色谱分析(CD) | 第66页 |
·结果与讨论 | 第66-74页 |
·红外光谱(FTIR)分析 | 第66-67页 |
·核磁共振分析(NMR) | 第67-68页 |
·凝胶电泳阻滞实验 | 第68-69页 |
·透射电镜观察结果分析 | 第69-70页 |
·激光粒度分析仪测试复合物粒径 | 第70-71页 |
·原子力显微镜观察(AFM) | 第71-73页 |
·圆二色谱分析(CD) | 第73-74页 |
·结论 | 第74-75页 |
第五章 N-亚甲基磷酸化壳聚糖介导基因转染的研究 | 第75-84页 |
·引言 | 第75页 |
·实验部分 | 第75-78页 |
·原料与仪器 | 第75-76页 |
·原料 | 第75-76页 |
·仪器 | 第76页 |
·菌体的培养及质粒的提取纯化 | 第76页 |
·转染细胞的准备 | 第76-77页 |
·亚甲基磷酸化壳聚糖及其复合物对HeLa细胞的细胞毒性评价 | 第77页 |
·亚甲基磷酸化壳聚糖转染荧光素酶质粒的实验研究 | 第77页 |
·亚甲基磷酸化壳聚糖盐型NMPCS-Ca/DNA复合物制备及转染研究 | 第77-78页 |
·结果与讨论 | 第78-83页 |
·细胞毒性分析 | 第78-79页 |
·NMPCS/DNA复合物基因转染实验结果 | 第79-82页 |
·聚合物-无机盐型NMPCS-Ca/DNA复合物转染结果 | 第82-83页 |
·结论 | 第83-84页 |
第六章 壳聚糖基非病毒载体荧光标记的研究 | 第84-93页 |
·引言 | 第84页 |
·实验部分 | 第84-87页 |
·原料与仪器 | 第84-85页 |
·原料 | 第84页 |
·仪器 | 第84-85页 |
·壳聚糖的FITC标记 | 第85页 |
·质粒DNA的荧光修饰 | 第85页 |
·标记效率的测定 | 第85-86页 |
·质粒DNA的提取和壳聚糖载基因纳米粒子的制备 | 第86页 |
·壳聚糖载基因纳米粒子的表征检测 | 第86页 |
·CNP体外细胞转染实验 | 第86页 |
·纳米粒子细胞内分布的初步研究 | 第86页 |
·统计学处理 | 第86-87页 |
·结果与讨论 | 第87-92页 |
·壳聚糖的荧光修饰 | 第87-88页 |
·反应温度对标记效率的影响 | 第88页 |
·凝胶电泳阻滞实验 | 第88-89页 |
·壳聚糖载基因纳米粒子体外细胞转染实验 | 第89页 |
·激光共聚焦显微镜观察 | 第89-92页 |
·结论 | 第92-93页 |
第七章 精氨酸修饰壳聚糖载基因血管支架的研究 | 第93-101页 |
·引言 | 第93页 |
·实验部分 | 第93-96页 |
·原料与仪器 | 第93-94页 |
·原料 | 第93-94页 |
·仪器 | 第94页 |
·精氨酸修饰壳聚糖质粒DNA纳米粒子(ACDNPs)的制备及表征 | 第94页 |
·精氨酸修饰壳聚糖基因支架的制备 | 第94-95页 |
·技术路线 | 第95页 |
·精氨酸修饰壳聚糖基因支架细胞基因转染实验 | 第95-96页 |
·精氨酸修饰壳聚糖基因支架兔颈动脉植入实验 | 第96页 |
·结果与讨论 | 第96-100页 |
·ACDNPs支架扫描电镜观察 | 第96-97页 |
·精氨酸修饰壳聚糖基因支架细胞基因转染实验 | 第97-98页 |
·精氨酸修饰壳聚糖基因支架兔颈动脉植入实验 | 第98-100页 |
·结论 | 第100-101页 |
全文主要结论 | 第101-103页 |
参考文献 | 第103-112页 |
攻读博士学位期间完成的论文 | 第112-113页 |
致谢 | 第113页 |