| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 1 引言 | 第10-24页 |
| ·猪圆环病毒 | 第10-15页 |
| ·病毒的分类及结构特点 | 第10页 |
| ·PCV 的理化特性 | 第10页 |
| ·基因组特性 | 第10-11页 |
| ·病毒编码蛋白 | 第11页 |
| ·PCV-2 的感染引起的机体变化 | 第11-12页 |
| ·PCV-2 的相关疾病 | 第12-13页 |
| ·PCV-2 细胞培养特性 | 第13页 |
| ·PCV-2 的主要检测方法 | 第13-15页 |
| ·猪细小病毒 | 第15-19页 |
| ·病毒的分类及结构特点 | 第15页 |
| ·病毒的理化特性 | 第15-16页 |
| ·病毒的基因组 | 第16页 |
| ·基因组编码蛋白 | 第16-17页 |
| ·细小病毒的发病机理及流行现状 | 第17页 |
| ·检测方法研究进展 | 第17-19页 |
| ·圆环病毒疫苗研究进展 | 第19-21页 |
| ·PCV 灭活苗 | 第19页 |
| ·PCV 弱毒疫苗 | 第19-20页 |
| ·核酸疫苗 | 第20页 |
| ·重组亚单位疫苗 | 第20-21页 |
| ·活载体疫苗 | 第21页 |
| ·细小病毒疫苗研究进展 | 第21-23页 |
| ·弱毒疫苗 | 第21-22页 |
| ·灭活疫苗 | 第22-23页 |
| ·基因工程亚单位疫苗 | 第23页 |
| ·猪圆环病毒与猪细小病毒协同感染的研究目的与意义 | 第23-24页 |
| 2 实验材料 | 第24-30页 |
| ·毒株与细胞 | 第24页 |
| ·实验动物 | 第24页 |
| ·菌种与质粒载体 | 第24页 |
| ·细胞转染所需试剂 | 第24页 |
| ·细胞培养所需主要试剂 | 第24-25页 |
| ·DNA 提取所需试剂 | 第25页 |
| ·聚合酶链式(PCR)及RT-PCR 反应所需试剂 | 第25页 |
| ·目的基因的克隆所需试剂 | 第25-26页 |
| ·质粒提取所需试剂 | 第26页 |
| ·SDS-PAGE 所需主要试剂 | 第26-27页 |
| ·Western-blotting 的所需的主要试剂 | 第27页 |
| ·主要试剂的配制 | 第27-29页 |
| ·主要仪器 | 第29-30页 |
| 3 实验方法 | 第30-44页 |
| ·病毒的增殖 | 第30页 |
| ·圆环病毒的增殖 | 第30页 |
| ·细小病毒的增殖 | 第30页 |
| ·蛋白酶K 法提取基因组 | 第30页 |
| ·目的基因ORF2 和VP2 的扩增、克隆测序 | 第30-34页 |
| ·引物设计 | 第30-31页 |
| ·目的基因的扩增 | 第31页 |
| ·PCR 产物的回收纯化 | 第31-32页 |
| ·克隆质粒pUC19-ORF2 的构建及克隆测序 | 第32-34页 |
| ·克隆质粒pUCm-T-VP2 的构建 | 第34页 |
| ·重组质粒 pCDNA3.1-ORF2、pCDNA3.1-VP2 和 pCDNA3.1-ORF2- VP2 的构建 | 第34-37页 |
| ·重组质粒pCDNA3.1-ORF2 的构建 | 第34-35页 |
| ·重组质粒pCDNA3.1-VP2 的构建 | 第35-36页 |
| ·重组质粒pCDNA3.1-ORF2-VP2 的构建 | 第36-37页 |
| ·重组质粒抗原基因体内表达试验 | 第37-39页 |
| ·重组质粒的大量制备及纯化 | 第37-38页 |
| ·重组质粒的浓度测定 | 第38页 |
| ·BALB/c 小鼠的DNA 免疫 | 第38页 |
| ·抗体的收集 | 第38页 |
| ·免疫小鼠抗体水平检测 | 第38-39页 |
| ·重组质粒抗原基因的体外表达 | 第39-41页 |
| ·G418 细胞最佳筛选浓度的测定 | 第39页 |
| ·转染质粒的制备 | 第39-40页 |
| ·转染质粒的线性化 | 第40页 |
| ·重组质粒细胞转染 | 第40-41页 |
| ·目的基因体外表达的RT-PCR 检测 | 第41页 |
| ·目的基因RNA 的提取 | 第41页 |
| ·RT-反应体系 | 第41页 |
| ·RT-PCR 检测 | 第41页 |
| ·目的基因体外表达的 Western-blotting 检测 | 第41-44页 |
| ·鼠抗 PCV-2、PPV 免疫血清的制备 | 第41-42页 |
| ·表达蛋白的 SDS-PAGE 电泳 | 第42-43页 |
| ·Western-blotting 检测 | 第43-44页 |
| 4 实验结果 | 第44-53页 |
| ·目的基因ORF2、VP2 的扩增结果 | 第44-45页 |
| ·克隆质粒 pUC19-ORF2 和 pUCm-T-VP2 的双酶切鉴定结果 | 第45-46页 |
| ·阳性克隆质粒pUC19-ORF2 双酶切鉴定结果 | 第45页 |
| ·克隆质粒pUCm-T-VP2 双酶切鉴定结果 | 第45-46页 |
| ·重组质粒 pCDNA3.1-ORF2、pCDNA3.1-VP2 和 pCDNA3.1-ORF2- VP2 的双酶切结果 | 第46-47页 |
| ·重组质粒pCDNA3.1-ORF2 双酶切鉴定结果 | 第46页 |
| ·重组质粒pCDNA3.1-VP2 双酶切鉴定结果 | 第46-47页 |
| ·重组质粒pCDNA3.1-ORF2-VP2 双酶切结果 | 第47页 |
| ·重组质粒浓度测定结果 | 第47-48页 |
| ·重组质粒抗原基因体内表达的检测结果 | 第48页 |
| ·抗原、抗体最佳稀释倍数的测定结果 | 第48页 |
| ·抗体水平检测结果 | 第48页 |
| ·G418 细胞最佳筛选浓度的测定 | 第48页 |
| ·重组质粒线性化结果 | 第48-49页 |
| ·目的基因体外表达的RT-PCR 检测结果 | 第49-51页 |
| ·目的基因体外表达的 Western-blotting 检测结果 | 第51-53页 |
| ·衣壳蛋白Cap 的Western-blotting 检测结果 | 第51-52页 |
| ·结构蛋白VP2 的Western-blotting 检测结果 | 第52-53页 |
| 5 讨论 | 第53-55页 |
| 6 结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-65页 |
| 附录A 猪圆环病毒ORF2 基因序列 | 第65-66页 |
| 附录B pcDNA3.1载体图谱 | 第66-67页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第67-68页 |
| 作者简历 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
