| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 1 前言 | 第11-13页 |
| 2 材料与方法 | 第13-29页 |
| ·材料 | 第13-14页 |
| ·猪繁殖与呼吸综合症病毒美洲毒株、细菌菌株及质粒载体 | 第13页 |
| ·工具酶及其它试剂盒 | 第13页 |
| ·仪器与设备 | 第13-14页 |
| ·细胞 | 第14页 |
| ·方法 | 第14-29页 |
| ·病毒总RNA 的提取 | 第14-15页 |
| ·E 基因的克隆 | 第15-20页 |
| ·引物的设计与合成 | 第15页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第15-16页 |
| ·E 基因的PCR 扩增 | 第16页 |
| ·PCR 产物的纯化、回收 | 第16-17页 |
| ·PCR 纯化产物与pMD18-T 载体连接 | 第17-18页 |
| ·制备感受态细胞 | 第18页 |
| ·感受态细胞的转化 | 第18页 |
| ·挑斑 | 第18页 |
| ·质粒DNA 的提取 | 第18-20页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第20页 |
| ·M 基因的克隆 | 第20-22页 |
| ·引物的设计与合成 | 第20-21页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第21页 |
| ·M 基因的PCR 扩增 | 第21-22页 |
| ·PCR 产物的纯化、回收 | 第22页 |
| ·PCR 产物M 与载体的连接 | 第22页 |
| ·E+2A+M 的构建 | 第22-24页 |
| ·酶切目的基因 | 第22-23页 |
| ·酶切产物的纯化、回收 | 第23页 |
| ·酶切产物与载体的连接 | 第23页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第23页 |
| ·感受态细胞的转化 | 第23页 |
| ·挑斑 | 第23页 |
| ·质粒DNA 的提取 | 第23页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第23页 |
| ·酶切产物与载体的连接 | 第23-24页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第24页 |
| ·感受态细胞的转化 | 第24页 |
| ·挑斑 | 第24页 |
| ·质粒DNA 的提取 | 第24页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第24页 |
| ·猪繁殖与呼吸综合症病毒E+2A+M 基因复制缺陷型腺病毒载体的构建 | 第24-29页 |
| ·猪繁殖与呼吸综合症病毒E+2A+M 基因复制缺陷型腺病毒穿梭载体的构建 | 第26页 |
| ·酶切目的基因和穿梭载体的连接 | 第26页 |
| ·感受态细菌的制备及连接产物转化 | 第26-27页 |
| ·质粒DNA 的提取及重组穿梭载体质粒的鉴定 | 第27页 |
| ·骨架载体pAdEasy-1 转化BJ5183 菌 | 第27页 |
| ·pAdEasy-1 BJ5183 细菌感受态的制备 | 第27页 |
| ·重组腺病毒质粒的构建 | 第27-28页 |
| ·重组腺病毒载体的鉴定 | 第28页 |
| ·用重组腺病毒质粒转化宿主菌 DH10B | 第28页 |
| ·脂质体介导的转染 | 第28页 |
| ·用荧光显微镜检测报告基因EGFP 的表达 | 第28-29页 |
| 3 结果 | 第29-38页 |
| ·E 基因克隆 | 第29-31页 |
| ·电泳结果 | 第29页 |
| ·酶切鉴定 | 第29页 |
| ·PCR 鉴定 | 第29页 |
| ·重组质粒的序列分析 | 第29-31页 |
| ·M 基因克隆 | 第31-34页 |
| ·电泳结果 | 第31-32页 |
| ·酶切定 | 第32页 |
| ·PCR 鉴定 | 第32页 |
| ·重组质粒的序列分析 | 第32-34页 |
| ·E+2A+M 的构建 | 第34-36页 |
| ·电泳结果 | 第34-35页 |
| ·酶切定 | 第35页 |
| ·PCR 鉴定 | 第35-36页 |
| ·重组复制缺陷型腺病毒质粒的构建 | 第36-37页 |
| ·由重组腺病毒质粒转染低代次293 细胞获得基因组结构均一的重组腺病毒 | 第37-38页 |
| ·用荧光显微镜检测报告基因EGFP 的表达 | 第38页 |
| 4 讨论 | 第38-41页 |
| ·RNA 提取 | 第38-39页 |
| ·目的基因的扩增与分析 | 第39页 |
| ·选用腺病毒载体构建重组猪繁殖与呼吸综合症疫苗的优点 | 第39-40页 |
| ·构建重组腺病毒的方法 | 第40-41页 |
| 5 结 论 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-44页 |
| 文献综述 | 第44-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
