| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 引言 | 第10-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-24页 |
| ·燃料乙醇的生产背景及研究意义 | 第11页 |
| ·燃料乙醇的生产现状及前景展望 | 第11-12页 |
| ·乙醇对酵母菌生长和发酵过程的抑制 | 第12页 |
| ·酿酒酵母乙醇耐性的机理 | 第12-14页 |
| ·提高酿酒酵母乙醇耐性的手段 | 第14-16页 |
| ·添加氨基酸或改变其代谢通路增加乙醇产量 | 第14-15页 |
| ·添加过不饱和脂肪酸或过量表达其合成关键酶 | 第15页 |
| ·添加金属离子提高乙醇耐性 | 第15页 |
| ·基因组改组以及全局转录工程 | 第15-16页 |
| ·酿酒酵母转录体系介绍 | 第16-20页 |
| ·TFIID转录复合体 | 第16-17页 |
| ·SAGA转录复合体 | 第17-18页 |
| ·SPT3与TFIID和SAGA之间的作用 | 第18-20页 |
| ·定向进化的研究进展 | 第20-23页 |
| ·构建突变文库的方法 | 第20-22页 |
| ·定向进化的应用 | 第22-23页 |
| ·本论文的目的和技术路线 | 第23-24页 |
| ·论文的目的 | 第23页 |
| ·实验技术路线 | 第23-24页 |
| 2 SPT3表达载体的构建 | 第24-54页 |
| ·实验材料 | 第24-26页 |
| ·主要试剂与培养基 | 第24-26页 |
| ·主要仪器 | 第26页 |
| ·实验方法 | 第26-41页 |
| ·表达载体的构建流程 | 第26-27页 |
| ·酿酒酵母S288C基因组DNA的提取 | 第27-28页 |
| ·pFA6a-kanMX4质粒小量提取 | 第28页 |
| ·PCR引物设计与合成 | 第28-29页 |
| ·Kan标记基因、PGK启动子、SPT3编码区的克隆 | 第29-37页 |
| ·对照质粒pRJ01的构建 | 第37-38页 |
| ·构建pRJ02质粒 | 第38-40页 |
| ·SPT3表达载体的构建 | 第40-41页 |
| ·实验结果与分析 | 第41-53页 |
| ·提取酿酒酵母S288C基因组DNA | 第41-42页 |
| ·pFA6a-kanMX4质粒提取 | 第42页 |
| ·Kan标记基因、PGK启动子、SPT3编码区的克隆 | 第42-48页 |
| ·对照质粒pRJ01的构建与鉴定 | 第48-49页 |
| ·pRJ02质粒的构建与鉴定 | 第49-51页 |
| ·SPT3表达载体的构建与鉴定 | 第51-53页 |
| ·小结 | 第53-54页 |
| 3 SPT3易错PCR突变文库的构建 | 第54-64页 |
| ·实验材料 | 第54页 |
| ·主要试剂和培养基 | 第54页 |
| ·实验方法 | 第54-57页 |
| ·易错PCR扩增SPT3编码区 | 第54-55页 |
| ·SPT3Ep连接pGEM-T Easy Vector | 第55页 |
| ·SPT3Ep连接表达载体pRJ03 | 第55-56页 |
| ·pRJ03Ep提取与验证 | 第56-57页 |
| ·结果与分析 | 第57-63页 |
| ·易错PCR扩增SPT3编码区 | 第57页 |
| ·构建pGEM-T SPT3Ep克隆载体 | 第57-58页 |
| ·SPT3Ep连接表达载体pRJ03 | 第58-59页 |
| ·pRJ03Ep提取与验证 | 第59-63页 |
| ·小结 | 第63-64页 |
| 4 获得SPT3酵母转化子和酵母突变文库筛选 | 第64-78页 |
| ·实验材料 | 第64页 |
| ·主要试剂和培养基 | 第64页 |
| ·实验方法 | 第64-68页 |
| ·电击法转化酿酒酵母 | 第64-65页 |
| ·酿酒酵母质粒提取 | 第65页 |
| ·酵母质粒鉴定 | 第65-67页 |
| ·酵母转化子功能分析 | 第67-68页 |
| ·结果与讨论 | 第68-74页 |
| ·酵母转化子的验证 | 第68-69页 |
| ·酵母转化子的乙醇耐性和发酵特性研究 | 第69-74页 |
| ·酵母突变体SPT3突变位点分析 | 第74-76页 |
| ·小结 | 第76-78页 |
| 结论 | 第78-79页 |
| 创新点与工作展望 | 第79-80页 |
| 创新点 | 第79页 |
| 工作展望 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-87页 |
| 附录A 论文中所用的PCR引物、菌株、质粒 | 第87-90页 |
| 附录B 突变株的SPT3 DNA测序结果 | 第90-92页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第92-93页 |
| 致谢 | 第93-94页 |
