副结核病DNA疫苗的构建及其免疫效果评价
| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-11页 |
| 前言 | 第11-18页 |
| 1 副结核病简介 | 第11-14页 |
| ·病原体 | 第11页 |
| ·流行病学 | 第11-13页 |
| ·禽分枝杆菌副结核亚种与克隆病 | 第13页 |
| ·副结核病诊断技术的研究进展 | 第13-14页 |
| 2 副结核病疫苗研究现状 | 第14-16页 |
| 3 本研究的目的和意义 | 第16-18页 |
| 实验部分 | 第18-48页 |
| 1 材料和方法 | 第18-33页 |
| ·载体、菌种和细胞 | 第18页 |
| ·血清与二抗 | 第18页 |
| ·实验动物 | 第18页 |
| ·主要试剂 | 第18-19页 |
| ·主要溶液和培养基的配制 | 第19-24页 |
| ·主要仪器 | 第24页 |
| ·引物的设计 | 第24-25页 |
| ·目的基因的扩增 | 第25页 |
| ·PCR产物与pMD18-T载体的连接转化 | 第25-26页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第26-27页 |
| ·真核表达载体的构建 | 第27页 |
| ·重组质粒的大量提取 | 第27-29页 |
| ·原核表达及纯化 | 第29页 |
| ·纯化蛋白的浓度测定 | 第29-30页 |
| ·动物免疫前准备 | 第30页 |
| ·动物分组及免疫接种 | 第30页 |
| ·免疫牛血清中特异性抗体的测定 | 第30-31页 |
| ·免疫牛淋巴细胞增殖试验 | 第31页 |
| ·免疫牛细胞因子的测定 | 第31-32页 |
| ·PPD皮内变态反应试验 | 第32页 |
| ·数据处理 | 第32-33页 |
| 2 结果 | 第33-44页 |
| ·目的基因的PCR扩增 | 第33页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第33-34页 |
| ·目的片段的序列分析 | 第34页 |
| ·原核表达纯化及浓度测定 | 第34-35页 |
| ·免疫牛血清特异性抗体的检测 | 第35-37页 |
| ·免疫牛淋巴细胞增殖水平的测定 | 第37-38页 |
| ·IFN-γ分泌水平的测定 | 第38-40页 |
| ·IL-2分泌水平的测定 | 第40-41页 |
| ·IL-4分泌水平的测定 | 第41-42页 |
| ·IL-6分泌水平的测定 | 第42-43页 |
| ·PPD皮内变态反应试验 | 第43-44页 |
| 3 讨论 | 第44-47页 |
| 4 结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 作者简介 | 第54-55页 |
| 附录 | 第55-60页 |
