| 中文摘要 | 第1-5页 |
| 英文摘要 | 第5-10页 |
| 第一部分 引言 | 第10-28页 |
| 一、表观遗传修饰与肿瘤 | 第10-16页 |
| 1. 组蛋白密码 | 第10-11页 |
| 2. 组蛋白乙酰化与肿瘤 | 第11-15页 |
| ·组蛋白乙酰化与转录激活 | 第11-13页 |
| ·组蛋白去乙酰化酶与去乙酰化酶抑制剂 | 第13-14页 |
| ·HDAC抑制剂与肿瘤 | 第14-15页 |
| 3. DNA甲基化与肿瘤 | 第15-16页 |
| 二、PI3K信号途径 | 第16-18页 |
| 1. PI3K/Akt pathway | 第16-17页 |
| 2. PIK3CA的肿瘤特异性突变 | 第17页 |
| 3. PI3K pathway功能 | 第17-18页 |
| 三、PTEN基因及其研究进展 | 第18-23页 |
| 1. 基因的发现与命名 | 第18-19页 |
| 2. 基因的结构 | 第19-20页 |
| 3. PTEN的活性调控 | 第20-21页 |
| 4. 基因的功能 | 第21-22页 |
| 5. 人类肿瘤中PTEN突变 | 第22-23页 |
| 四、维生素D与肿瘤 | 第23-24页 |
| 1. 维生素D的代谢 | 第23页 |
| 2. 维生素D的作用方式 | 第23页 |
| 3. 维生素D与肿瘤 | 第23-24页 |
| 五、本论文研究的内容与意义 | 第24-28页 |
| （一） 立题依据 | 第24-26页 |
| （二） 本文研究内容和意义 | 第26-28页 |
| 第二部分 实验材料与方法 | 第28-41页 |
| 一、实验材料 | 第28页 |
| （一） 质粒 | 第28页 |
| （二） 蛋白质和抗体 | 第28页 |
| （三） 哺乳动物细胞系 | 第28页 |
| （四） 试剂 | 第28页 |
| 二、实验方法 | 第28-41页 |
| 1、分子生物学实验方法 | 第28-35页 |
| （一） 分子克隆 | 第28-29页 |
| （二） DNA的琼脂糖电泳 | 第29页 |
| （三） 质粒大量制备的方法 | 第29-30页 |
| （四） 哺乳动物细胞总RNA的提取和逆转录 | 第30-31页 |
| （五） PCR和荧光实时定量（real-time）PCR | 第31-33页 |
| （六） 染色质免疫沉淀实验（Chromatin immunoprecipitation，ChIP) | 第33-35页 |
| （七） RNA 干涉（siRNA） | 第35页 |
| Ⅱ、细胞生物学实验方法 | 第35-40页 |
| （一） 哺乳动物细胞系的培养 | 第35页 |
| （二） 磷酸钙转染法 | 第35-36页 |
| （三） 荧光素酶报告基因检测 | 第36-37页 |
| （四） 脂质体转染 | 第37页 |
| （五） 稳定转染细胞系建立 | 第37页 |
| （六） 蛋白质的Western Blotting分析 | 第37-39页 |
| （七） 免疫共沉淀（coimmuno-precipitation assay， CoIP ） | 第39页 |
| （八） 台盼蓝染色检测细胞凋亡 | 第39-40页 |
| （九） Hoechst33342 染色检测细胞凋亡 | 第40页 |
| （十） MTT法检测细胞活力 | 第40页 |
| （十一） 流式细胞术检测细胞凋亡 | 第40页 |
| Ⅲ、统计分析 | 第40-41页 |
| 第三部分 实验结果与分析 | 第41-74页 |
| 一、组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA促进辐射诱导的细胞坏死 | 第41-43页 |
| （一） TSA与紫外辐射促进细胞坏死 | 第41页 |
| （二） TSA与X-ray辐射促进细胞坏死 | 第41-42页 |
| （三） TSA与X-ray能够促进PTEN及其主要转录因子Egr-1 表达 | 第42-43页 |
| 二、组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA通过上调PTEN表达增强阿霉素诱导的细胞凋亡 | 第43-56页 |
| （一） PTEN在TSA与阿霉素诱导的细胞凋亡中起重要作用 | 第43-45页 |
| 1. TSA促进阿霉素诱导的细胞凋亡 | 第43-44页 |
| 2. PTEN参与TSA/阿霉素诱导的细胞凋亡 | 第44-45页 |
| （二） PTEN的主要转录因子Egr-1 表达上调影响TSA/阿霉素诱导的细胞凋亡 | 第45页 |
| （三） HDAC抑制剂通过上调PTEN基因启动子乙酰化水平诱导其表达 | 第45-50页 |
| 1. PTEN启动子报告基因检测时相确定 | 第45-46页 |
| 2. HDAC抑制剂TSA促进PTEN基因表达 | 第46-47页 |
| 3. HDAC抑制剂NaBu促进PTEN基因表达 | 第47-48页 |
| 4. 组蛋白去乙酰化酶抑制PTEN启动子活性 | 第48-49页 |
| 5. TSA上调PTEN启动子乙酰化水平 | 第49-50页 |
| （四） 组蛋白乙酰转移酶p300 促进PTEN基因表达 | 第50-54页 |
| 1. 组蛋白乙酰转移酶p300 以剂量依赖方式促进PTEN基因表达 | 第50-51页 |
| 2. p300 可被招募到PTEN启动子上并促进组蛋白乙酰化 | 第51-52页 |
| 3. p300 与Egr-1 协同促进PTEN基因转录 | 第52-54页 |
| （五） HDAC抑制剂加强p300 与Egr-1 对PTEN的转录激活 | 第54-56页 |
| 三、维生素D通过上调PTEN表达增强HDAC抑制剂TSA/NaBu与甲基化酶抑制剂 5-Aza诱导的胃癌细胞凋亡 | 第56-74页 |
| （一） 不同恶性程度胃癌细胞中PTEN表达不同 | 第56-59页 |
| 1. 四种胃癌细胞中PTEN表达差异 | 第56-57页 |
| 2. 不同恶性程度胃癌细胞中PTEN表达差异机制 | 第57-59页 |
| （二） 维生素D通过上调PTEN基因表达诱导胃癌细胞凋亡 | 第59-61页 |
| 1. 维生素D促进胃癌HGC-27 细胞凋亡 | 第59-60页 |
| 2. 维生素D刺激促进PTEN表达 | 第60页 |
| 3. PTEN在维生素D诱导的胃癌细胞凋亡中起重要作用 | 第60-61页 |
| （三） 维生素D通过其生理性受体VDR促进PTEN表达 | 第61-63页 |
| 1. 维生素D受体VDR促进PTEN基因表达 | 第61-62页 |
| 2. VDR结合与PTEN启动子 | 第62-63页 |
| （四） VDR与p300、Egr-1 协同促进PTEN表达 | 第63-64页 |
| 1. VDR与p300 及Egr-1 协同促进PTEN表达 | 第63页 |
| 2. VDR与p300 及Egr-1 存在于同一复合体 | 第63-64页 |
| （五） 维生素D增强HDAC抑制剂TSA/NaBu诱导的细胞凋亡 | 第64-69页 |
| 1. 维生素D与HDAC抑制剂协同促进PTEN表达 | 第64-65页 |
| 2. 维生素D增强HDAC抑制剂TSA/NaBu诱导的细胞凋亡 | 第65-66页 |
| 3. PTEN在维生素D与TSA/NaBu诱导的细胞凋亡中起作用 | 第66-67页 |
| 4. HDAC抑制剂促进PTEN启动子乙酰化水平提高，促进转录因子结 | 第67-69页 |
| （六） 维生素D增强甲基化酶抑制剂5-Aza诱导的细胞凋亡 | 第69-74页 |
| 1. 维生素D与甲基化酶抑制剂5-Aza协同促进PTEN表达 | 第69-70页 |
| 2. 维生素D增强甲基化酶抑制剂5-Aza诱导的细胞凋亡 | 第70-71页 |
| 3. 5-Aza促进Egr-1 的表达及其在PTEN启动子上的结合 | 第71-74页 |
| 第四部分 讨论 | 第74-78页 |
| 一、HDAC抑制剂浓度及处理时间对细胞作用的差异 | 第74页 |
| 二、TSA与X-ray联合作用效果探讨 | 第74-75页 |
| 三、HDAC抑制剂TSA促进PTEN表达机制 | 第75-76页 |
| 四、组蛋白乙酰转移酶p300 促进PTEN表达机制 | 第76页 |
| 五、不同分化程度胃癌细胞基因表达差异 | 第76页 |
| 六、维生素D摄入量探讨 | 第76-78页 |
| 主要结论和创新点 | 第78-80页 |
| 参考文献 | 第80-97页 |
| 附录 | 第97-98页 |
| 致谢 | 第98-99页 |
| 在学期间公开发表论文及著作情况 | 第99页 |
