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人参皂苷合成关键酶βAS基因转化水稻的研究

摘要第1-8页
Abstract第8-10页
1 综述第10-25页
   ·引言第10页
   ·人参皂苷的研究概况第10-14页
     ·人参皂苷的主要药理作用第10-12页
       ·增强免疫力第10-11页
       ·抗动脉硬化、保护心肌第11页
       ·抗肿瘤第11页
       ·抗病毒第11页
       ·抗衰老第11-12页
       ·其它作用第12页
     ·人参皂苷的生物合成途径第12-13页
     ·β-香树脂醇合成酶(βAS)基因的研究进展第13-14页
   ·转基因水稻的研究概况第14-20页
     ·水稻遗传转化技术第14-17页
       ·农杆菌介导转化法第14-15页
       ·基因枪法第15页
       ·PEG 法第15-16页
       ·电激法第16页
       ·花粉管通道法第16-17页
       ·低能离子束介导法第17页
       ·脂质体介导转化法第17页
       ·其他方法第17页
     ·转基因技术在水稻育种上的应用第17-20页
       ·抗虫转基因水稻育种第17-18页
       ·抗病转基因水稻育种第18页
       ·抗除草剂转基因水稻育种第18页
       ·抗逆转基因水稻育种第18-19页
       ·稻米营养品质改良第19-20页
   ·转基因植物的安全性问题第20-24页
     ·标记基因在转基因水稻中的使用第20页
     ·标记基因存在的问题第20-21页
       ·安全性第20-21页
       ·影响多重转化第21页
       ·影响转化细胞再生第21页
     ·去除标记基因的方法第21-24页
       ·共转化法第21-23页
       ·转座子第23页
       ·同源重组第23页
       ·位点特异重组酶系统第23-24页
   ·本研究的目的和意义第24-25页
2 材料与方法第25-33页
   ·材料第25-26页
     ·植物材料第25页
     ·菌株与质粒第25页
     ·主要试剂第25页
     ·PCR 扩增引物第25-26页
     ·主要仪器设备第26页
     ·水稻遗传转化培养基第26页
   ·实验方法第26-33页
     ·目的基因开放阅读框的扩增和TA 克隆第26-29页
       ·PCR 扩增目的基因ORF第26-27页
       ·目的片段的回收第27页
       ·TA 克隆第27-28页
       ·大肠杆菌感受态细胞的制备(CaCl_2 法)第28页
       ·连接反应产物转化大肠杆菌感受态细胞(热激法)第28页
       ·PCR 鉴定目的基因片段及测序第28-29页
     ·大肠杆菌质粒DNA 的提取第29页
     ·植物表达载体构建第29-30页
       ·酶切第29-30页
       ·连接第30页
       ·热激转化法第30页
       ·重组子的筛选鉴定第30页
     ·水稻愈伤组织的诱导第30-31页
       ·接种第30页
       ·掐芽第30-31页
       ·继代第31页
     ·植物表达载体转化根癌农杆菌第31-32页
       ·根癌农杆菌感受态细胞的制备第31页
       ·根癌农杆菌转化第31页
       ·农杆菌转化子的鉴定第31-32页
     ·根癌农杆菌介导转化水稻第32-33页
       ·胚性愈伤预培养第32页
       ·农杆菌培养第32页
       ·共培养第32页
       ·除菌、转移愈伤第32页
       ·抗性愈伤组织的继代筛选与再生植株第32-33页
     ·转基因植株的分子检测第33页
       ·植株DNA 分子的抽提第33页
       ·抗性植株PCR 检测第33页
3 结果与分析第33-39页
   ·目的基因编码序列的的克隆第33-34页
   ·植物表达载体的构建第34-37页
   ·植物表达载体 pCDMAR-βAS-hpt 转化农杆菌 EHA105第37页
   ·水稻的遗传转化与植株再生第37页
   ·转基因植株的分子检测第37-39页
4 讨论第39-41页
   ·外源基因表达启动子的选择第39-40页
   ·双T-DNA 植物表达载体的构建第40页
   ·后续工作及展望第40-41页
参考文献第41-49页
附录第49-52页
致谢第52页

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