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转Bt基因抗虫玉米田间试验与遗传稳定性分析

中文摘要第1-12页
英文摘要第12-14页
1 引言第14-37页
   ·Bt抗虫基因及其转基因玉米育种的研究进展第15-20页
     ·Bt杀虫蛋白基因第15-16页
     ·Bt杀虫基因资源的开发第16-17页
     ·国外Bt转基因抗虫玉米育种研究进展第17-19页
     ·国内Bt转基因抗虫玉米育种研究进展第19-20页
   ·玉米转基因方法第20-21页
     ·农杆菌介导法第20页
     ·基因枪法第20-21页
     ·花粉管通道法第21页
   ·转Bt基因植物的筛选及鉴定方法第21-24页
     ·标记基因和报告基因第21-22页
     ·分子检测第22页
     ·免疫技术第22页
     ·生物抗性鉴定第22-23页
     ·农艺性状筛选第23-24页
   ·转基因作物的遗传稳定性第24-26页
     ·转基因植物外源基因遗传与表达的稳定性第24-25页
     ·植物的生长发育对转基因表达稳定性的影响第25页
     ·外界环境条件对转基因表达稳定性的影响第25-26页
     ·外源基因在转基因植物中的沉默第26页
   ·转基因作物的安全性评价第26-34页
     ·转基因作物的食品安全性第27-28页
     ·转基因作物的生态安全性第28-30页
     ·转基因作物安全性评估的原则第30页
     ·转基因作物安全性争论的实质第30-31页
     ·对策第31-33页
     ·展望第33-34页
   ·目的和意义第34-35页
   ·课题来源与主要研究内容第35-37页
     ·课题的来源第35页
     ·主要研究内容第35-36页
     ·技术路线第36-37页
2 材料与方法第37-56页
   ·实验材料第37-39页
   ·常用溶液配制第39-40页
   ·实验试剂配制第40-42页
   ·实验方法第42-56页
     ·琼脂糖凝胶中DNA片段的回收第42页
     ·碱裂解法少量提取质粒DNA第42页
     ·植物组织基因组DNA的提取——CTAB法第42-43页
     ·转基因植株的PCR检测第43页
     ·随机引物法标记放射性探针第43-44页
     ·Southern杂交第44-45页
     ·转基因植株的PCR-Southern杂交第45页
     ·植物总RNA的提取(Trizol提取法)第45页
     ·玉米cDNA的合成第45-46页
     ·RT-PCR分析第46-47页
     ·Western印迹第47-48页
     ·蛋白含量的测定(考马斯亮兰G250法)第48页
     ·转基因植株的Bt蛋白含量测定(ELISA检测)第48-49页
     ·转基因玉米的田间玉米螟抗性测定第49-50页
     ·转基因玉米的室内玉米螟抗性测定第50页
     ·玉米的控制授粉第50页
     ·转Bt基因玉米高代自交系主要农艺性状考察第50-52页
     ·转cry1Ah基因抗虫玉米杂交后代的遗传规律及稳定性分析第52-54页
     ·转cry1Ah和cry1Ie双价基因抗虫玉米的选育第54页
     ·生存竞争能力检测第54-55页
     ·数据分析第55-56页
3 结果与分析第56-99页
   ·转cry1Ah基因抗虫玉米高代自交系的遗传稳定性分析及纯系筛选第56-74页
     ·转cry1Ah基因抗虫玉米植株PCR检测及纯系筛选、验证第56-58页
     ·Southern blot检测第58页
     ·Western blot检测Bt杀虫蛋白的表达第58-59页
     ·PCR阳性植株转录水平分析第59-60页
     ·ELISA检测Cry1Ah的表达量第60-65页
     ·田间玉米螟抗性分析第65-68页
     ·室内玉米螟抗性分析第68-69页
     ·抗虫玉米Cry1Ah蛋白表达量与抗虫性的相关分析第69-70页
     ·转cry1Ah基因抗虫玉米的农艺性状第70-74页
   ·转cry1Ah基因抗虫玉米杂交后代的抗虫性鉴定及遗传分析第74-81页
     ·转cry1Ah基因抗虫玉米杂交后代的遗传规律第74-76页
     ·转cry1Ah基因抗虫玉米杂交后代玉米螟抗虫性鉴定第76-78页
     ·抗虫玉米杂交及回交后代Cry1Ah蛋白表达量检测第78-79页
     ·转cry1Ah基因抗虫玉米杂交后代农艺性状分析第79-81页
   ·转crylAh和cry1Ie双价基因抗虫玉米遗传稳定性分析及纯系筛选第81-94页
     ·转双价基因抗虫玉米的纯系筛选及遗传规律分析第81-86页
     ·PCR-Southern blot检测第86-87页
     ·Western blot检测Bt杀虫蛋白的表达第87-88页
     ·PCR阳性植株转录水平分析第88-90页
     ·ELISA检测Cry1Ah的表达量第90-92页
     ·玉米螟抗性分析第92页
     ·转cry1Ah和cry1Ie基因抗虫玉米的农艺性状调查第92-94页
   ·生存竞争力结果第94-99页
     ·荒地调查结果分析第94-97页
     ·转基因玉米自生苗数量第97页
     ·栽培地调查结果分析第97-98页
     ·种子发芽活力检测第98-99页
4 讨论第99-104页
   ·转基因抗虫玉米的纯系筛选第99页
   ·转基因抗虫玉米的遗传分析第99-100页
   ·转Bt基因玉米的抗虫性与Bt蛋白含量的关系第100-101页
   ·转Bt基因玉米的农艺性状调查分析第101-102页
   ·转Bt基因抗虫玉米的生存竞争能力分析第102页
   ·关于转基因育种的一点儿体会和下一步工作展望第102-104页
5 结论第104-106页
   ·转基因抗虫玉米的遗传规律分析及纯系筛选第104页
   ·转基因玉米的Bt蛋白含量测定与抗虫性鉴定第104-106页
致谢第106-107页
参考文献第107-118页
附录第118-124页
攻读博士学位期间发表的学术论文第124页

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