| 中文摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 缩略词表 | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第12-31页 |
| ·昆虫病理学和苏云金芽胞杆菌 | 第12页 |
| ·苏云金芽胞杆菌的发现 | 第12-13页 |
| ·苏云金芽胞杆菌的分类 | 第13页 |
| ·苏云金芽胞杆菌蛋白的分类 | 第13-15页 |
| ·δ-内毒素 | 第14-15页 |
| ·δ-内毒素的形态和结构 | 第14页 |
| ·蛋白质晶体的生化特性 | 第14页 |
| ·δ-内毒素的分类 | 第14-15页 |
| ·苏云金芽胞杆菌的其它毒素 | 第15页 |
| ·β-外毒素(β-exotoxin) | 第15页 |
| ·α-外毒素(α-exotoxin) | 第15页 |
| ·γ-外毒素(γ-exotoxin) | 第15页 |
| ·苏云金芽胞杆菌蛋白质晶体毒素的致病机理 | 第15-16页 |
| ·杀虫晶体蛋白在昆虫中肠的降解 | 第15-16页 |
| ·杀虫晶体蛋白与中肠细胞膜受体的结合 | 第16页 |
| ·苏云金芽胞杆菌蛋白质晶体的三级结构及其功能 | 第16-18页 |
| ·苏云金芽胞杆菌杀虫蛋白的应用 | 第18-19页 |
| ·苏云金芽胞杆菌生物制剂的发展 | 第18-19页 |
| ·转Rt植物研究进展 | 第19页 |
| ·蛋白质分子改造的途径 | 第19-30页 |
| ·随机诱变 | 第20-22页 |
| ·物理诱变 | 第20页 |
| ·化学诱变 | 第20-21页 |
| ·致错PCR(ERROR-PRONE PCR) | 第21-22页 |
| ·定向诱变 | 第22-30页 |
| ·寡核苷酸介导的定点诱变 | 第22页 |
| ·引物定点引入法 | 第22-23页 |
| ·盒式诱变(cassette mutagenesis) | 第23页 |
| ·重叠延伸PCR(overlap extension PCR,OE-PCR) | 第23-24页 |
| ·大引物PCR法(megaprimer PCR) | 第24页 |
| ·DNA改组(DNA shuffling) | 第24-28页 |
| ·StEP重组 | 第28页 |
| ·核酸交换切割的DNA改组技术 | 第28页 |
| ·随机引物体外重组法 | 第28页 |
| ·渐增切割法产生杂和酶 | 第28-29页 |
| ·过渡模板随机嵌合生长 | 第29页 |
| ·不依赖序列同源性的蛋白质重组 | 第29-30页 |
| ·研究的目的与意义 | 第30-31页 |
| 2 材料和方法 | 第31-35页 |
| ·实验材料 | 第31页 |
| ·基因来源 | 第31页 |
| ·菌株和载体 | 第31页 |
| ·主要菌株 | 第31页 |
| ·主要载体 | 第31页 |
| ·实验方法 | 第31-35页 |
| ·扩增5个Cry杀虫蛋白原始基因片段 | 第31-32页 |
| ·基因的片段化 | 第32页 |
| ·基因片段的重组 | 第32页 |
| ·重组片段与载体连接 | 第32页 |
| ·包含重组蛋白的阳性克隆筛选 | 第32-33页 |
| ·重组基因的序列测序 | 第33页 |
| ·重组基因的序列比对 | 第33页 |
| ·重组蛋白氨基酸性质分析软件 | 第33-34页 |
| ·重组基因在大肠杆菌中的诱导表达 | 第34页 |
| ·重组蛋白的杀虫毒力测定 | 第34页 |
| ·重组克隆Cry蛋白含量测定 | 第34-35页 |
| ·重组蛋白杀虫数统计软件 | 第35页 |
| 3 结果与分析 | 第35-59页 |
| ·1000个重组基因克隆的获得 | 第35-36页 |
| ·1000个重组克隆核苷酸序列的测定 | 第36-38页 |
| ·1000个重组克隆杀虫毒力的测定方法的确定 | 第38-39页 |
| ·5个cry基因来源的重组克隆的不同杀虫效果的克隆数比较 | 第39-40页 |
| ·不同杀虫效果组内部克隆氨基酸序列的同源性比较 | 第40页 |
| ·cry1Ac来源的重组克隆相关实验结果和分析 | 第40-51页 |
| ·cry1Ac重组克隆的毒力测定结果 | 第40-41页 |
| ·cry1Ac来源的杀虫毒性提高的重组蛋白中突变分析 | 第41-46页 |
| ·杀虫毒性提高的克隆的突变位点的分布 | 第41-42页 |
| ·毒力提高重组蛋白中氨基酸的理化性质变化对蛋白结构和功能的影响 | 第42-46页 |
| ·杀虫毒力持平重组克隆中存在的突变类型及毒性变化的原因分析 | 第46-47页 |
| ·杀虫毒性下降的重组克隆中存在的突变分析 | 第47-51页 |
| ·cry2A*来源的重组克隆相关实验结果和分析 | 第51-58页 |
| ·cry2A*重组克隆的毒力测定结果 | 第51-52页 |
| ·cry2A*来源的杀虫毒力提高的重组蛋白中突变分析 | 第52-56页 |
| ·cry2A*来源毒力持平和下降的克隆组中氨基酸突变分析 | 第56-57页 |
| ·cry2A*来源重组克隆的同源性的比较分析 | 第57-58页 |
| ·对突变后cry2A*来源克隆数量较多的原因分析 | 第58页 |
| ·cry1Ab来源的重组克隆序列相关实验结果和分析 | 第58-59页 |
| ·cry1C*来源的重组克隆序列相关实验结果和分析 | 第59页 |
| ·cry9C*源的重组克隆序列相关实验结果和分析 | 第59页 |
| 4 讨论 | 第59-69页 |
| ·cry1Ac来源的重组克隆突变结果的探讨 | 第59-64页 |
| ·cry1Ac来源的重组克隆突变的类型及规律 | 第60-62页 |
| ·Cry1A家族蛋白间的序列相关性分析 | 第62-64页 |
| ·cry2A*来源的重组克隆突变结果的探讨 | 第64-69页 |
| ·cry2A*来源的重组克隆突变的类型及规律 | 第64页 |
| ·Cry2A家族蛋白间的序列相关性分析 | 第64-69页 |
| 5 参考文献 | 第69-79页 |
| 附录1 | 第79页 |
| 附录2 | 第79-80页 |
| 在读期间发表论文 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81页 |
