| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 缩略词表 | 第13-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-26页 |
| 1.1 心肌梗死概述 | 第15-16页 |
| 1.2 CRP的研究现状 | 第16-18页 |
| 1.2.1 CRP的生物学特征 | 第16-17页 |
| 1.2.2 CRP在心血管疾病中的研究进展 | 第17-18页 |
| 1.3 心肌梗死中miR-21的研究现状 | 第18-21页 |
| 1.3.1 MicroRNAs的调控机制及其作用 | 第18-19页 |
| 1.3.2 miR-21作为心肌梗死的治疗靶标 | 第19-21页 |
| 1.4 miR-21的下游靶基因PDCD4、PTEN和Spry1 | 第21-24页 |
| 1.4.1 PDCD4在心肌梗死中的作用 | 第21页 |
| 1.4.2 PTEN在心肌梗死中的作用 | 第21-23页 |
| 1.4.3 Spry1在心肌梗死中的作用 | 第23-24页 |
| 1.5 研究目的、意义和内容 | 第24-26页 |
| 1.5.1 研究目的 | 第24页 |
| 1.5.2 研究意义 | 第24-25页 |
| 1.5.3 研究内容 | 第25-26页 |
| 第二章 构建与鉴定CRP基因沉默的H9c2心肌细胞株 | 第26-44页 |
| 2.1 引言 | 第26-28页 |
| 2.1.1 RNA干扰 | 第26页 |
| 2.1.2 慢病毒载体概述 | 第26-28页 |
| 2.2 材料和仪器 | 第28-30页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第28-29页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第29-30页 |
| 2.3 实验方法 | 第30-40页 |
| 2.3.1 shRNA的设计与合成 | 第30-31页 |
| 2.3.2 shRNA片段与表达载体的连接 | 第31-34页 |
| 2.3.3 慢病毒的包装与纯化 | 第34-35页 |
| 2.3.4 细胞培养 | 第35-36页 |
| 2.3.5 共转染H9c2心肌细胞 | 第36-37页 |
| 2.3.6 总RNA提取 | 第37-38页 |
| 2.3.7 cDNA的合成 | 第38页 |
| 2.3.8 荧光定量PCR | 第38-40页 |
| 2.3.9 统计学分析 | 第40页 |
| 2.4 实验结果 | 第40-43页 |
| 2.4.1 表达载体双酶切电泳鉴定结果 | 第40页 |
| 2.4.2 四质粒共转染293T细胞 | 第40-41页 |
| 2.4.3 荧光显微镜检测H9c2心肌细胞转染效率 | 第41-42页 |
| 2.4.4 H9c2心肌细胞中沉默CRP基因效率鉴定 | 第42-43页 |
| 2.5 讨论 | 第43页 |
| 2.6 本章小结 | 第43-44页 |
| 第三章 CRP基因沉默对H9c2心肌细胞中miR-21及其靶基因表达的影响 | 第44-52页 |
| 3.1 引言 | 第44-45页 |
| 3.2 材料和仪器 | 第45页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第45页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第45页 |
| 3.3 实验方法 | 第45-48页 |
| 3.3.1 MTT检测H9c2心肌细胞活性 | 第45-46页 |
| 3.3.2 总RNA提取 | 第46页 |
| 3.3.3 Taqman探针法测定miR-21相对表达量 | 第46-47页 |
| 3.3.4 SYBR染料法测定PDCD4、PTEN和Spry1相对表达量 | 第47-48页 |
| 3.3.5 统计学分析 | 第48页 |
| 3.4 实验结果 | 第48-50页 |
| 3.4.1 沉默CRP基因对H9c2心肌细胞活性的影响 | 第48-49页 |
| 3.4.2 沉默CRP基因对H9c2心肌细胞中miR-21表达的影响 | 第49页 |
| 3.4.3 沉默CRP基因对H9c2心肌细胞中PDCD4、PTEN和Spry1表达的影响 | 第49-50页 |
| 3.5 讨论 | 第50-51页 |
| 3.6 本章小结 | 第51-52页 |
| 第四章 CRP敲除对大鼠心肌缺血模型中miR-21及其靶基因的调控作用 | 第52-69页 |
| 4.1 引言 | 第52-55页 |
| 4.1.1 心肌缺血模型概述 | 第52-53页 |
| 4.1.2 CRP敲除模型动物 | 第53-54页 |
| 4.1.3 激光捕获显微切割技术 | 第54-55页 |
| 4.2 材料和仪器 | 第55-56页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第55-56页 |
| 4.2.2 实验仪器 | 第56页 |
| 4.3 实验方法 | 第56-62页 |
| 4.3.1 ELISA测定大鼠血浆CRP浓度 | 第56-57页 |
| 4.3.2 大鼠心肌缺血模型的建立 | 第57-59页 |
| 4.3.3 冰冻切片的制作 | 第59页 |
| 4.3.4 TTC染色 | 第59页 |
| 4.3.5 HE染色 | 第59-60页 |
| 4.3.6 激光捕获显微切割 | 第60-61页 |
| 4.3.7 总RNA提取 | 第61页 |
| 4.3.8 Taqman探针法测定miR-21相对表达量 | 第61页 |
| 4.3.9 SYBR染料法测定PDCD4、PTEN和Spry1相对表达量 | 第61页 |
| 4.3.10 统计学分析 | 第61-62页 |
| 4.4 实验结果 | 第62-67页 |
| 4.4.1 ELISA鉴定大鼠血浆CRP浓度 | 第62页 |
| 4.4.2 病理染色鉴定大鼠心肌的正常区和缺血区 | 第62-63页 |
| 4.4.3 敲除CRP基因对大鼠心肌缺血模型中miR-21表达的影响 | 第63-64页 |
| 4.4.4 敲除CRP基因对大鼠心肌缺血模型中miR-21靶基因表达的影响. | 第64-67页 |
| 4.5 讨论 | 第67-68页 |
| 4.6 本章小结 | 第68-69页 |
| 结论与展望 | 第69-71页 |
| 结论 | 第69页 |
| 创新之处 | 第69页 |
| 展望 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-80页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 附件 | 第82页 |
