| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 英文缩略表 | 第13-15页 |
| 第一章 引言 | 第15-32页 |
| 1.1 水貂病毒性肠炎 | 第15-25页 |
| 1.1.1 水貂病毒性肠炎概述 | 第15-16页 |
| 1.1.2 水貂肠炎病毒病原学 | 第16页 |
| 1.1.3 水貂肠炎病毒的分子生物学特征 | 第16-18页 |
| 1.1.4 水貂肠炎病毒编码的蛋白及其功能 | 第18-23页 |
| 1.1.5 水貂肠炎病毒特异性受体 | 第23页 |
| 1.1.6 水貂肠炎病毒复制机制 | 第23-24页 |
| 1.1.7 水貂病毒性肠炎的诊断和防治 | 第24-25页 |
| 1.2 细胞凋亡 | 第25-32页 |
| 1.2.1 概述 | 第25-26页 |
| 1.2.2 细胞凋亡与细胞坏死的区别 | 第26页 |
| 1.2.3 细胞凋亡的途径 | 第26-28页 |
| 1.2.4 病毒感染与细胞凋亡 | 第28-30页 |
| 1.2.5 细小病毒及其非结构蛋白NS1诱导细胞凋亡 | 第30-32页 |
| 第二章 水貂肠炎病毒诱导细胞凋亡 | 第32-43页 |
| 2.1 试验材料 | 第32-33页 |
| 2.1.1 试验动物、细胞和毒种 | 第32页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第32页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第32-33页 |
| 2.2 试验方法 | 第33-36页 |
| 2.2.1 MEVB的扩增及其病毒滴度的测定 | 第33页 |
| 2.2.2 试验动物分组与攻毒试验 | 第33页 |
| 2.2.3 试验动物样品采集 | 第33页 |
| 2.2.4 MEV感染水貂后病理学变化 | 第33-35页 |
| 2.2.5 TUNEL细胞凋亡检测 | 第35页 |
| 2.2.6 MEV感染F81细胞后对细胞增殖的影响 | 第35页 |
| 2.2.7 流式细胞术检测细胞周期 | 第35-36页 |
| 2.2.8 流式细胞术检测细胞凋亡率 | 第36页 |
| 2.2.9 数据分析 | 第36页 |
| 2.3 结果 | 第36-41页 |
| 2.3.1 MEV感染水貂病理变化 | 第36-39页 |
| 2.3.2 MEV诱导水貂体内不同组织细胞凋亡情况 | 第39-40页 |
| 2.3.3 MEV抑制F81细胞活性 | 第40页 |
| 2.3.4 MEV感染诱导F81细胞周期阻滞 | 第40-41页 |
| 2.3.5 MEV感染诱导F81细胞凋亡 | 第41页 |
| 2.4 讨论 | 第41-42页 |
| 2.5 小结 | 第42-43页 |
| 第三章 水貂肠炎病毒NS1蛋白调控宿主细胞凋亡 | 第43-62页 |
| 3.1 实验材料 | 第43-44页 |
| 3.1.1 细胞株 | 第43页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第43-44页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第44页 |
| 3.2 试验方法 | 第44-50页 |
| 3.2.1 提取病毒基因组 | 第44页 |
| 3.2.2 构建真核表达质粒 | 第44-47页 |
| 3.2.3 鉴定目的蛋白表达 | 第47-48页 |
| 3.2.4 不同蛋白对细胞生存状态的影响 | 第48页 |
| 3.2.5 流式细胞术检测细胞周期 | 第48页 |
| 3.2.6 流式细胞术检测不同蛋白诱导细胞凋亡情况 | 第48-49页 |
| 3.2.7 Hoechst染色 | 第49页 |
| 3.2.8 DNA Ladder检测 | 第49页 |
| 3.2.9 超微结构观察 | 第49-50页 |
| 3.2.10 数据分析 | 第50页 |
| 3.3 结果 | 第50-60页 |
| 3.3.1 MEV NS1、NS2、VP1和VP2真核表达质粒构建 | 第50-51页 |
| 3.3.2 MEV NS1、NS2、VP1和VP2蛋白表达分析 | 第51-52页 |
| 3.3.3 MTT检测MEV NS1、VP1和VP2蛋白对细胞活性的影响 | 第52-53页 |
| 3.3.4 LDH方法检测MEV NS1、VP1和VP2蛋白对细胞毒性的影响 | 第53-54页 |
| 3.3.5 MEV NS1、VP1和VP2蛋白对细胞周期的影响 | 第54-55页 |
| 3.3.6 MEV NS1、VP1和VP2蛋白对细胞凋亡的影响 | 第55-56页 |
| 3.3.7 MEV NS2蛋白对细胞周期和细胞凋亡的影响 | 第56-57页 |
| 3.3.8 Hoechst染色 | 第57-58页 |
| 3.3.9 DNA片段化分析 | 第58-59页 |
| 3.3.10 电镜观察MEV NS1蛋白诱导细胞凋亡 | 第59-60页 |
| 3.4 讨论 | 第60-61页 |
| 3.5 小结 | 第61-62页 |
| 第四章 水貂肠炎病毒NS1蛋白通过线粒体信号通路诱导细胞凋亡 | 第62-76页 |
| 4.1 试验材料 | 第62-63页 |
| 4.1.1 细胞和质粒 | 第62-63页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第63页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第63页 |
| 4.2 试验方法 | 第63-66页 |
| 4.2.1 构建p38 MAPK报告基因质粒 | 第63页 |
| 4.2.2 检测Caspase-3/9 活性 | 第63-64页 |
| 4.2.3 Western blot试验 | 第64页 |
| 4.2.4 细胞线粒体分离 | 第64页 |
| 4.2.5 检测线粒体膜电位变化 | 第64-65页 |
| 4.2.6 检测细胞内活性氧 | 第65页 |
| 4.2.7 检测线粒体通透性 | 第65-66页 |
| 4.2.8 双荧光素酶检测试验 | 第66页 |
| 4.2.9 数据分析 | 第66页 |
| 4.3 结果 | 第66-73页 |
| 4.3.1 MEV NS1蛋白通过激活Caspase-9 引起细胞凋亡 | 第66-67页 |
| 4.3.2 MEV NS1蛋白对细胞内Caspase-9 和Caspase-3 活性的影响 | 第67-68页 |
| 4.3.3 MEV NS1蛋白通过线粒体介导的凋亡通路诱导细胞凋亡 | 第68-69页 |
| 4.3.4 MEV NS1蛋白诱导细胞线粒体膜电位消失 | 第69-70页 |
| 4.3.5 MEV NS1蛋白诱导细胞线粒体通透性转变孔开放 | 第70-71页 |
| 4.3.6 MEV NS1蛋白引起细胞内ROS的积累 | 第71页 |
| 4.3.7 MEV NS1蛋白抑制p38 MAPK和p53启动子表达 | 第71-72页 |
| 4.3.8 p38 MAPK和p53参与调控MEV NS1蛋白诱导细胞凋亡 | 第72-73页 |
| 4.4 讨论 | 第73-75页 |
| 4.5 小结 | 第75-76页 |
| 第五章 全文结论 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-91页 |
| 附录 | 第91-94页 |
| 致谢 | 第94-95页 |
| 作者简历 | 第95-96页 |
