| 缩略语表 | 第10-12页 |
| 摘要 | 第12-14页 |
| Abstract | 第14-15页 |
| 第1章 引言 | 第16-23页 |
| 1.1 视紫红质的概述 | 第16-18页 |
| 1.2 甲藻类转基因技术 | 第18-19页 |
| 1.3 Piggy Bac系统以及哺乳动物细胞表达系统 | 第19-21页 |
| 1.4 Kozak序列与Flag标签的选择 | 第21页 |
| 1.5 细胞免疫荧光在亚细胞定位中的应用 | 第21-22页 |
| 1.6 主要研究内容和研究路线 | 第22-23页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第23-46页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-25页 |
| 2.1.1 基因来源 | 第23页 |
| 2.1.2 实验用细胞株及菌株 | 第23页 |
| 2.1.3 质粒 | 第23-25页 |
| 2.1.4 引物合成 | 第25页 |
| 2.2 实验仪器与试剂 | 第25-29页 |
| 2.2.1 常用仪器 | 第25-26页 |
| 2.2.2 常用试剂和材料 | 第26-29页 |
| 2.3 重组表达载体的构建 | 第29-36页 |
| 2.3.1 重组表达载体PB513B-PdRhod的构建 | 第29-34页 |
| 2.3.2 重组表达载体PB513B-AcRhod的构建 | 第34-35页 |
| 2.3.3 去内毒素小提质粒 | 第35-36页 |
| 2.4 HEK293T细胞的培养 | 第36-37页 |
| 2.4.1 细胞复苏 | 第36-37页 |
| 2.4.2 细胞传代 | 第37页 |
| 2.4.3 细胞冻存 | 第37页 |
| 2.5 构建基因稳定表达系统 | 第37-41页 |
| 2.5.1 质粒转染 | 第37-38页 |
| 2.5.2 稳定细胞系的筛选 | 第38页 |
| 2.5.3 稳定细胞株的总RNA提取以及cDNA合成 | 第38-41页 |
| 2.6 Western blot检测 | 第41-44页 |
| 2.7 细胞免疫荧光法进行亚细胞定位 | 第44-46页 |
| 第3章 实验结果与讨论 | 第46-64页 |
| 3.1 目的基因扩增结果 | 第46-47页 |
| 3.2 空载体单双酶切检测结果 | 第47-48页 |
| 3.3 重组表达载体PB513B-PdRhod与PB513B-AcRhod结构图与检测结果 | 第48-52页 |
| 3.3.1 重组表达载体PB513B-PdRhod结构图 | 第49页 |
| 3.3.2 PB513B-PdRhod酶切检测 | 第49页 |
| 3.3.3 PB513B-PdRhod菌体PCR检测 | 第49-50页 |
| 3.3.4 PB513B-PdRhod插入片段测序鉴定 | 第50-51页 |
| 3.3.5 重组表达载体PB513B-AcRhod结构图 | 第51页 |
| 3.3.6 PB513B-AcRhod酶切检测 | 第51-52页 |
| 3.3.7 PB513B-AcRhod菌体PCR检测 | 第52页 |
| 3.3.8 PB513B-AcRhod插入片段测序鉴定 | 第52页 |
| 3.4 质粒转染结果 | 第52-56页 |
| 3.5 总RNA逆转录后PCR结果 | 第56-57页 |
| 3.6 稳定转染细胞筛选结果 | 第57-58页 |
| 3.7 Western Blot验证结果 | 第58-59页 |
| 3.8 细胞免疫荧光共聚焦图像 | 第59-61页 |
| 3.9 讨论 | 第61-64页 |
| 3.9.1 甲藻视紫红质基因哺乳动物细胞表达系统的构建 | 第61页 |
| 3.9.2 宿主细胞的选择 | 第61页 |
| 3.9.3 微生物视紫红质基因的亚细胞定位 | 第61-62页 |
| 3.9.4 质子泵型视紫红质的类型与功能 | 第62-64页 |
| 第4章 结论与展望 | 第64-65页 |
| 附录 | 第65-76页 |
| 参考文献 | 第76-83页 |
| 致谢 | 第83页 |
