| 摘要 | 第4-7页 |
| Abstract | 第7-10页 |
| 英文缩略语 | 第11-17页 |
| 第一部分 BAG3介导的选择性自噬通路在大鼠原代软骨细胞中的表达研究 | 第17-40页 |
| 1 前言 | 第17-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-29页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-22页 |
| 2.1.1 实验动物及原代软骨细胞获取 | 第21页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第21页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第21-22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-29页 |
| 2.2.1 大鼠原代软骨细胞的提取、培养和鉴定 | 第22-23页 |
| 2.2.3 细胞免疫染色 | 第23页 |
| 2.2.4 MIA干预细胞 | 第23-24页 |
| 2.2.5 细胞免疫荧光 | 第24页 |
| 2.2.6 Western-Blot方法检测细胞HSPA8,HSPB8,BAG3,FLNA,LC3B,SQSTM1和β-Actin等蛋白的表达 | 第24-26页 |
| 2.2.7 RT-qPCR方法检测细胞内HSPA8,HSPB8,BAG3,FLNA,LC3B,SQSTM1等基因的mRNA水平 | 第26-27页 |
| 2.2.8 巴佛洛霉素A1干预细胞 | 第27-28页 |
| 2.2.9 Western-Blot方法检测细胞HSPA8,HSPB8,BAG3,FLNA,LC3B,SQSTM1和β-Actin等蛋白的表达 | 第28页 |
| 2.2.10 RT-qPCR方法检测细胞内HSPA8,HSPB8,BAG3,FLNA,LC3B,SQSTM1等基因的mRNA水平 | 第28页 |
| 2.2.11 统计学分析 | 第28-29页 |
| 3 结果 | 第29-37页 |
| 3.1 大鼠原代软骨细胞照相与鉴定 | 第29页 |
| 3.2 免疫荧光检测II型胶原和ADAMTS5的表达变化 | 第29-30页 |
| 3.3 不同浓度MIA不同干预时间对大鼠原代软骨细胞CASA通路相关蛋白的影响 | 第30-33页 |
| 3.3.1 CCK8检测不同干预条件下细胞活性变化 | 第31页 |
| 3.3.2 Westernblot检测CASA通路相关蛋白的表达水平 | 第31-32页 |
| 3.3.3 RT-qPCR检测CASA通路相关蛋白基因转录水平 | 第32-33页 |
| 3.4 巴佛洛霉素A1(BafilomycinA1)干预对软骨细胞内CASA通路活动的影响 | 第33-37页 |
| 3.4.1 CCK8检测不同干预条件下细胞活性变化 | 第33-34页 |
| 3.4.2 Westernblot检测CASA通路相关蛋白的表达水平 | 第34-35页 |
| 3.4.3 RT-qPCR检测CASA通路相关蛋白基因转录水平 | 第35-37页 |
| 4 讨论 | 第37-39页 |
| 5 结论 | 第39-40页 |
| 第二部分 运动干预对OA模型大鼠膝关节软骨中CASA通路活动的作用研究 | 第40-58页 |
| 1 前言 | 第40-43页 |
| 2 材料与方法 | 第43-49页 |
| 2.1 实验材料 | 第43-44页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第43页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第43页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第43-44页 |
| 2.2 实验方法 | 第44-49页 |
| 2.2.1 OA动物模型的建立 | 第44页 |
| 2.2.2 动物OA模型的运动干预 | 第44-45页 |
| 2.2.3 动物取材 | 第45页 |
| 2.2.4 石蜡包埋、切片 | 第45页 |
| 2.2.5 HE、甲苯胺蓝染色以及组织学评分 | 第45-46页 |
| 2.2.6 免疫组化染色检测Ⅱ型胶原、ADAMTS5、SQSTM1、LC3B和BECLIN1 | 第46页 |
| 2.2.7 用ELISA检测血清,关节腔灌洗液中的IL-1β和IL-4水平 | 第46-47页 |
| 2.2.8 Western-Blot方法检测细胞Ⅱ型胶原,ADAMTS5,HSPA8,HSPB8,BAG3,FLNA,LC3B,SQSTM1和β-Actin等蛋白的表达 | 第47页 |
| 2.2.9 RT-qPCR方法检测细胞内HSPA8,HSPB8,BAG3,FLNA,LC3B,SQSTM1等基因的mRNA水平 | 第47-48页 |
| 2.2.10 统计学分析 | 第48-49页 |
| 3 结果 | 第49-55页 |
| 3.1 膝关节软骨的组织学评价 | 第49页 |
| 3.2 血清和关节腔灌洗液的ELISA检测 | 第49-50页 |
| 3.3 Ⅱ型胶原和ADAMTS5在关节软骨中的变化 | 第50-51页 |
| 3.4 自噬标记物在关节软骨中的表达分布 | 第51-52页 |
| 3.5 CASA相关蛋白在关节软骨中的表达 | 第52-53页 |
| 3.6 CASA相关蛋白基因的转录水平变化 | 第53-55页 |
| 4 讨论 | 第55-57页 |
| 5 结论 | 第57-58页 |
| 本论文创新性的自我评价 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-66页 |
| 文献综述 | 第66-79页 |
| 参考文献 | 第72-79页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 个人简历 | 第81页 |
