致谢 | 第5-6页 |
摘要 | 第6-8页 |
ABSTRACT | 第8-9页 |
英文缩略表 | 第10-13页 |
1 前言 | 第13-19页 |
1.1 KS的流行病学 | 第13页 |
1.2 KS组织发生 | 第13-14页 |
1.3 KSHV | 第14页 |
1.4 KSHV编码的相关蛋白 | 第14-16页 |
1.4.1 ORF73/LANA | 第15页 |
1.4.2 ORF72/v-Cyclin | 第15页 |
1.4.3 病毒复制与转录激活因子(RTA) | 第15-16页 |
1.4.4 KSHV编码的G蛋白偶联受体(vGPCR) | 第16页 |
1.5 MIRNA的简介 | 第16-18页 |
1.5.1 Let-7的简介 | 第17-18页 |
1.6 RBPJ、LANA、LET-7A之间的关系 | 第18-19页 |
2 实验材料与仪器 | 第19-22页 |
2.1 材料、试剂和主要仪器 | 第19-22页 |
2.1.1 细胞株 | 第19页 |
2.1.2 细胞培养基 | 第19页 |
2.1.3 试剂和试剂盒 | 第19页 |
2.1.4 主要仪器设备 | 第19-20页 |
2.1.5 常用试剂的配制 | 第20页 |
2.1.6 qPCR引物 | 第20-22页 |
3 实验方法和步骤 | 第22-29页 |
3.1 293 T、ISLK.219细胞 | 第22页 |
3.2 细胞培养 | 第22-23页 |
3.3 DOX母液配制 | 第23页 |
3.4 KSHV病毒的浓缩制取 | 第23页 |
3.5 质粒转化、扩增和转染 | 第23-26页 |
3.5.1 质粒DNA的转化 | 第23页 |
3.5.2 质粒扩增及抽提 | 第23-24页 |
3.5.3 细胞瞬时转染 | 第24页 |
3.5.4 实时荧光定量 | 第24-26页 |
3.6 WESTERNBLOT检测LANA、LIN28B、NF-ΚB、RBPJ的蛋白水平 | 第26-27页 |
3.7 萤光素酶活性测定 | 第27页 |
3.8 细胞内和细胞外KSHV基因组的分离和定量 | 第27页 |
3.9 NORTHERN-BLOTS | 第27-28页 |
3.10 统计学分析 | 第28-29页 |
4 结果 | 第29-43页 |
4.1 LANA上调LET-7A和PRI-LET-7AFD水平的同时下调RBPJ的表达水平 | 第29-31页 |
4.2 LANA通过下调NF-ΚB和LIN28B来上调LET-7A | 第31-33页 |
4.3 LANA通过增加NICD诱导PRI-LET-7AFD的转录水平 | 第33-35页 |
4.4 LET-7A直接抑制RBPJ的表达 | 第35-36页 |
4.5 过表达LET-7A成剂量依赖性抑制KSHV的裂解再激活 | 第36-38页 |
4.6 过表达LET-7A成时间依赖性抑制KSHV的裂解再激活 | 第38-39页 |
4.7 敲低RBPJ成剂量依赖性抑制KSHV的裂解再激活 | 第39-41页 |
4.8 敲低RBPJ成时间依赖性抑制KSHV的裂解再激活 | 第41-43页 |
5 讨论 | 第43-46页 |
6 结论 | 第46-47页 |
参考文献 | 第47-52页 |
中文综述 | 第52-60页 |
参考文献 | 第58-60页 |
作者简介 | 第60页 |