| 摘要 | 第4-5页 |
| abstract | 第5-6页 |
| 引言 | 第12-21页 |
| 0.1 毕赤酵母真核表达系统 | 第12-14页 |
| 0.1.1 巴斯德毕赤酵母 | 第12页 |
| 0.1.2 毕赤酵母表达 | 第12-13页 |
| 0.1.3 毕赤酵母表达外源淀粉样蛋白 | 第13-14页 |
| 0.2 内质网应激与蛋白质二硫键异构酶 | 第14-16页 |
| 0.2.1 内质网应激 | 第14-15页 |
| 0.2.2 蛋白质二硫键异构酶 | 第15-16页 |
| 0.3 淀粉样蛋白 | 第16-18页 |
| 0.3.1 淀粉样蛋白与疾病 | 第16-17页 |
| 0.3.2 胱抑素C | 第17-18页 |
| 0.4 转录组测序 | 第18-19页 |
| 0.5 研究目的及意义 | 第19-21页 |
| 第一章 重组毕赤酵母菌株的构建 | 第21-44页 |
| 1.1 实验材料 | 第21-27页 |
| 1.1.1 菌株和表达载体 | 第21页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第21-23页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第23页 |
| 1.1.4 实验引物序列 | 第23-24页 |
| 1.1.5 培养基与化学试剂的配制 | 第24-27页 |
| 1.2 实验方法 | 第27-37页 |
| 1.2.1 外源淀粉样蛋白cC胞外表达载体pPICZαA-cC的构建 | 第27-31页 |
| 1.2.2 重组分泌外源cC蛋白毕赤酵母GS115菌株的获得 | 第31-32页 |
| 1.2.3 过表达PDI胞内表达载体pPIC3.5K-PDI的构建 | 第32-35页 |
| 1.2.4 重组过表达PDI和双重重组毕赤酵母GS115菌株的获得 | 第35-37页 |
| 1.3 实验结果 | 第37-43页 |
| 1.3.1 构建pPICZαA-cC外源胞外蛋白穿梭质粒 | 第37-38页 |
| 1.3.2 构建pPIC3.5K-PDI胞内蛋白穿梭质粒 | 第38-41页 |
| 1.3.3 获得重组毕赤酵母菌株的验证 | 第41-43页 |
| 1.4 本章小结 | 第43-44页 |
| 第二章 过表达PDI对毕赤酵母表达蛋白的影响 | 第44-54页 |
| 2.1 实验材料 | 第44-48页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第44-45页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第45-46页 |
| 2.1.3 主要化学试剂的配制 | 第46-48页 |
| 2.2 实验方法 | 第48-50页 |
| 2.2.1 蛋白的诱导表达 | 第48页 |
| 2.2.2 诱导表达蛋白的提取 | 第48-49页 |
| 2.2.3 SDS-PAGE电泳 | 第49页 |
| 2.2.4 Western Blotting检测 | 第49-50页 |
| 2.3 实验结果 | 第50-53页 |
| 2.3.1 PDI的表达结果 | 第50页 |
| 2.3.2 SDS-PAGE结果分析 | 第50-52页 |
| 2.3.3 Western Blotting结果分析 | 第52-53页 |
| 2.4 本章小结 | 第53-54页 |
| 第三章 PDI影响淀粉样蛋白表达的差异基因的筛选及验证 | 第54-65页 |
| 3.1 实验材料 | 第54-56页 |
| 3.1.1 主要试剂 | 第54页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第54-55页 |
| 3.1.3 实验引物 | 第55-56页 |
| 3.2 实验方法 | 第56-57页 |
| 3.2.1 RNA样品的提取 | 第56页 |
| 3.2.2 高通量RNA-Seq测序 | 第56页 |
| 3.2.3 实时荧光定量qRT-PCR | 第56-57页 |
| 3.3 实验结果 | 第57-64页 |
| 3.3.1 RNA-Seq测序结果 | 第57-58页 |
| 3.3.2 差异基因的筛选 | 第58-62页 |
| 3.3.3 差异基因的再次验证 | 第62-64页 |
| 3.4 本章小结 | 第64-65页 |
| 结论与展望 | 第65-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-72页 |
| 攻读学位期间发表学术论文及参加科研情况 | 第72-73页 |
