| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 第1章 引言 | 第12-17页 |
| 1.1 概述 | 第12页 |
| 1.2 促胰岛素分泌肽 | 第12-13页 |
| 1.3 内质网应激(ERS)与糖尿病 | 第13-15页 |
| 1.3.1 内质网应激与胰岛素分泌 | 第13-14页 |
| 1.3.2 内质网应激与细胞凋亡 | 第14页 |
| 1.3.3 内质网应激下游信号通路 | 第14-15页 |
| 1.4 小鼠胰岛杂交瘤细胞Min6 | 第15页 |
| 1.5 本文的目的及意义 | 第15-17页 |
| 第2章 AWRK6促胰岛素分泌的功能与机制 | 第17-33页 |
| 2.1 引言 | 第17页 |
| 2.2 实验材料 | 第17-21页 |
| 2.2.1 细胞系 | 第17页 |
| 2.2.2 主要仪器和设备 | 第17-18页 |
| 2.2.3 实验所用主要试剂 | 第18页 |
| 2.2.4 溶液和培养基的配制 | 第18-21页 |
| 2.3 实验方法 | 第21-26页 |
| 2.3.1 细胞培养 | 第21页 |
| 2.3.2 细胞冻存 | 第21页 |
| 2.3.3 Elisa检测AWRK6的促胰岛素分泌功能 | 第21-22页 |
| 2.3.4 荧光检测AWRK6的结合位置 | 第22页 |
| 2.3.5 Min6细胞GLP-1R的RNAi模型构建 | 第22-23页 |
| 2.3.6 Min6细胞膜蛋白提取 | 第23-24页 |
| 2.3.7 BCA试剂盒检测蛋白浓度 | 第24页 |
| 2.3.8 GLP-1R沉默检测 | 第24-25页 |
| 2.3.9 AWRK6对GLP-1受体沉默型Min6的促胰岛素分泌作用 | 第25-26页 |
| 2.3.10 PKA和Epac的抑制剂对AWRK6促胰岛素分泌作用的影响 | 第26页 |
| 2.4 实验结果 | 第26-29页 |
| 2.4.1 细胞培养结果 | 第26-27页 |
| 2.4.2 AWRK6的促胰岛素分泌检测结果 | 第27页 |
| 2.4.3 AWRK6的结合位置荧光检测结果 | 第27-28页 |
| 2.4.4 Min6细胞GLP-1受体RNAi结果 | 第28页 |
| 2.4.5 AWRK6对GLP-1受体沉默型Min6细胞的促胰岛素分泌作用 | 第28-29页 |
| 2.4.6 Epac2抑制剂和PKA抑制剂对AWRK6促胰岛素分泌作用的影响 | 第29页 |
| 2.5 讨论 | 第29-32页 |
| 2.6 本章小结 | 第32-33页 |
| 第3章 AWRK6抑制Min6细胞凋亡的功能及机制 | 第33-41页 |
| 3.1 引言 | 第33页 |
| 3.2 实验材料 | 第33-34页 |
| 3.2.1 主要仪器 | 第33页 |
| 3.2.2 实验所用主要试剂 | 第33-34页 |
| 3.3 实验方法 | 第34-37页 |
| 3.3.1 流式细胞仪检测细胞存活率 | 第34-35页 |
| 3.3.2 Min6细胞总蛋白提取 | 第35-36页 |
| 3.3.3 Caspase-9和Caspase-3的Western Blot检测 | 第36-37页 |
| 3.4 实验结果 | 第37-39页 |
| 3.4.1 流式细胞仪检测Min6凋亡结果 | 第37-38页 |
| 3.4.2 AWRK6对Caspase-9和Caspase-3活性的影响 | 第38页 |
| 3.4.3 AWRK6能抑制凋亡相关蛋白Caspase-12、Caspase9和Caspase-3的活化 | 第38-39页 |
| 3.5 讨论 | 第39-40页 |
| 3.6 本章小结 | 第40-41页 |
| 第4章 AWRK6对Akt蛋白表达及活性的影响 | 第41-46页 |
| 4.1 引言 | 第41页 |
| 4.2 实验材料 | 第41-42页 |
| 4.2.1 实验所需药剂 | 第41页 |
| 4.2.2 主要仪器 | 第41页 |
| 4.2.3 实验试剂 | 第41-42页 |
| 4.3 实验方法 | 第42-43页 |
| 4.3.1 小鼠胰岛细胞总蛋白提取 | 第42页 |
| 4.3.2 WesternBlot检测AWRK6处理后Akt及其磷酸化水平 | 第42页 |
| 4.3.3 Akt抑制AWRK6对Min6细胞凋亡的影响 | 第42-43页 |
| 4.4 实验结果 | 第43-45页 |
| 4.4.1 AWRK6促进Akt的磷酸化 | 第43-44页 |
| 4.4.2 AWRK6对Akt抑制剂处理的Min6细胞凋亡的影响 | 第44页 |
| 4.4.3 AWRK6对Akt抑制剂处理的Min6细胞Caspase-9活性的影响 | 第44-45页 |
| 4.5 讨论 | 第45页 |
| 4.6 本章小结 | 第45-46页 |
| 结论 | 第46-47页 |
| 致谢 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-54页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文及参加科研情况 | 第54-55页 |
