| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 缩略语 | 第12-13页 |
| 第一章 引言 | 第13-27页 |
| 1.1 CRISPR/Cas系统介导的基因组编辑 | 第13-16页 |
| 1.1.1 CRISPR/Cas系统 | 第13-14页 |
| 1.1.2 CRISPR/Cas9系统 | 第14-16页 |
| 1.1.3 CRISPR/dCas9系统 | 第16页 |
| 1.2 基于CRISPR/Cas系统的RNA靶向调控 | 第16-18页 |
| 1.2.1 RCas9系统 | 第17页 |
| 1.2.2 CRISPR/Cas变体 | 第17-18页 |
| 1.3 CRISPR/Cas9系统介导的基因组编辑在植物中的应用 | 第18-21页 |
| 1.3.1 靶向诱变和基因敲除 | 第18-19页 |
| 1.3.2 基因插入和性状叠加 | 第19页 |
| 1.3.3 基因表达调控 | 第19页 |
| 1.3.4 基因在基因组中的定位 | 第19-20页 |
| 1.3.5 不含标记基因的转基因植物 | 第20-21页 |
| 1.3.6 植物病毒防御 | 第21页 |
| 1.4 CRISPR突变体的筛选方法 | 第21-24页 |
| 1.4.1 PCR/RE测定 | 第21-22页 |
| 1.4.2 错配酶切割法 | 第22页 |
| 1.4.3 HRM分析测定 | 第22-23页 |
| 1.4.4 ACT-PCR测定 | 第23-24页 |
| 1.4.5 测序分析 | 第24页 |
| 1.5 CRISPR/Cas9技术在植物中的脱靶效应 | 第24-25页 |
| 1.6 立题依据 | 第25-27页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第27-39页 |
| 2.1 实验材料 | 第27-30页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第27页 |
| 2.1.2 载体和菌株 | 第27-28页 |
| 2.1.3 引物设计及合成 | 第28-29页 |
| 2.1.4 主要试剂及试剂盒 | 第29页 |
| 2.1.5 仪器设备 | 第29-30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-39页 |
| 2.2.1 水稻OsMPK15基因敲除载体Cas9-OsMPK15的构建 | 第30-33页 |
| 2.2.2 水稻的遗传转化 | 第33页 |
| 2.2.3 OsMPK15基因敲除水稻的筛选及鉴定 | 第33-35页 |
| 2.2.4 OsMPK15基因敲除水稻表型检测 | 第35页 |
| 2.2.5 光照对OsMPK15基因在幼苗中表达的影响 | 第35-36页 |
| 2.2.6 水稻叶片中BR相关基因在OsMPK15基因敲除水稻中的表达检测 | 第36-37页 |
| 2.2.7 OsMPK15基因敲除水稻光合作用指标的测定 | 第37页 |
| 2.2.8 OsMPK15基因敲除水稻花粉活力的检测 | 第37页 |
| 2.2.9 OsMPK15基因敲除水稻干旱耐受力的检测 | 第37-38页 |
| 2.2.10 OsMPK15基因敲除水稻种子萌发和对ABA敏感性的检测 | 第38-39页 |
| 第三章 结果与分析 | 第39-57页 |
| 3.1 OsMPK15基因敲除水稻的构建 | 第39-45页 |
| 3.1.1 OsMPK15基因敲除靶位点的选取 | 第39-40页 |
| 3.1.2 OsMPK15基因敲除载体Cas9-OsMPK15的构建 | 第40-41页 |
| 3.1.3 OsMPK15基因敲除水稻的构建 | 第41-42页 |
| 3.1.4 OsMPK15基因敲除水稻纯合子的筛选 | 第42-43页 |
| 3.1.5 OsMPK15基因敲除位点的特异性验证 | 第43-45页 |
| 3.2 OsMPK15基因敲除对水稻表型的影响 | 第45-48页 |
| 3.2.1 幼苗期水稻叶角测量 | 第45页 |
| 3.2.2 成熟期水稻农艺学性状统计 | 第45-46页 |
| 3.2.3 OsMPK15基因敲除对水稻花粉活性的影响 | 第46-47页 |
| 3.2.4 OsMPK15基因敲除对BR信号通路相关基因表达的影响 | 第47-48页 |
| 3.3 OsMPK15基因敲除对水稻光合作用的影响 | 第48-51页 |
| 3.3.1 光照对OsMPK15基因在幼苗期叶片中表达的影响 | 第48-49页 |
| 3.3.2 水稻叶片光合相关生理指标的测定 | 第49-50页 |
| 3.3.3 水稻叶片光合色素含量测定 | 第50-51页 |
| 3.4 OsMPK15基因敲除对水稻抗旱相关生理指标的影响 | 第51-54页 |
| 3.4.1 干旱对水稻叶片中MDA、H2O2、可溶性蛋白积累的影响 | 第51-53页 |
| 3.4.2 干旱对水稻叶片中抗氧化酶活性的影响 | 第53-54页 |
| 3.5 OsMPK15基因敲除对水稻萌发以及ABA敏感性的影响 | 第54-57页 |
| 3.5.1 OsMPK15基因敲除对水稻种子萌发的影响 | 第54-55页 |
| 3.5.2 OsMPK15基因敲除对水稻种子ABA敏感性的影响 | 第55-57页 |
| 第四章 讨论 | 第57-63页 |
| 4.1 OsMPK15基因通过BR信号通路影响水稻叶角 | 第57-59页 |
| 4.2 OsMPK15基因的表达与光合过程负相关 | 第59-60页 |
| 4.3 OsMPK15基因敲除降低水稻的耐旱性 | 第60-61页 |
| 4.4 OsMPK15基因敲除导致水稻对ABA的敏感性提高 | 第61-63页 |
| 第五章 结论 | 第63-65页 |
| 参考文献 | 第65-75页 |
| 致谢 | 第75-77页 |
| 攻读硕士期间的研究成果 | 第77-79页 |
