| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 缩略语 | 第9-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-21页 |
| 1. 细胞自噬概述 | 第13-14页 |
| 2. 细胞自噬的调控机制 | 第14-16页 |
| 3. 细胞凋亡概述 | 第16页 |
| 4. 细胞凋亡的调控机制 | 第16页 |
| 5. 昆虫细胞的自噬与凋亡 | 第16-18页 |
| 5.1 昆虫细胞的自噬与凋亡 | 第16-17页 |
| 5.2 家蚕细胞的自噬与凋亡 | 第17-18页 |
| 6. 乙酰化修饰对蛋白生物学功能的影响概述 | 第18-20页 |
| 7. 蛋白乙酰化修饰与细胞自噬 | 第20页 |
| 8. 家蚕蛋白乙酰化修饰与功能 | 第20-21页 |
| 第二章 实验设计方案 | 第21-23页 |
| 1. 研究目的和意义 | 第21页 |
| 2. 研究内容 | 第21-22页 |
| 3. 技术路线 | 第22-23页 |
| 第三章 家蚕atg8基因的克隆、表达及多克隆抗体的制备 | 第23-36页 |
| 1. 材料与方法 | 第23-27页 |
| 1.1 细胞、菌株及质粒 | 第23页 |
| 1.2 试剂与技术支持 | 第23-27页 |
| 2. 方法 | 第27-31页 |
| 2.1 家蚕Bm N细胞总RNA的提取 | 第27页 |
| 2.2 家蚕Bm N细胞总RNA中DNA的去除 | 第27-28页 |
| 2.3 家蚕Bm N细胞c DNA的合成 | 第28页 |
| 2.4 家蚕atg8基因的克隆 | 第28-29页 |
| 2.5 重组质粒p ET28a-atg8的鉴定 | 第29-30页 |
| 2.6 重组质粒p ET28a-atg8转化BL21（DE3）大肠杆菌 | 第30页 |
| 2.7 家蚕Atg8蛋白在大肠杆菌中的诱导表达 | 第30-31页 |
| 2.8 家蚕Atg8蛋白的提取纯化 | 第31页 |
| 2.9 多克隆抗体的制备 | 第31页 |
| 3. 实验结果 | 第31-34页 |
| 3.1 原核表达载体p ET28a-atg8的构建 | 第31-32页 |
| 3.2 重组蛋白的诱导表达及纯化 | 第32-34页 |
| 3.3 抗体检测 | 第34页 |
| 4. 讨论 | 第34-36页 |
| 第四章 家蚕Atg8乙酰化修饰对细胞自噬的影响 | 第36-49页 |
| 1. 材料与试剂 | 第36-37页 |
| 1.1 细胞、菌株及质粒 | 第36页 |
| 1.2 试剂与技术支持 | 第36-37页 |
| 2. 方法 | 第37-42页 |
| 2.1 EBSS诱导的家蚕Bm N细胞自噬模型的建立 | 第37页 |
| 2.2 WB检测EBSS对家蚕Bm N细胞自噬的影响 | 第37-38页 |
| 2.3 模拟乙酰化与去乙酰化修饰的重组瞬时表达载体的构建 | 第38-39页 |
| 2.4 m Cherry融合的模拟乙酰化与去乙酰化修饰重组修饰表达载体的构建 | 第39页 |
| 2.5 家蚕Atg8乙酰化修饰位点的验证 | 第39-40页 |
| 2.5.1 实验组的设置 | 第39页 |
| 2.5.2 磁珠的准备 | 第39-40页 |
| 2.5.3 抗体与磁珠的孵育 | 第40页 |
| 2.5.4 细胞样品的准备 | 第40页 |
| 2.5.5 磁珠与细胞样品的孵育 | 第40页 |
| 2.5.6 蛋白洗脱与制样 | 第40页 |
| 2.6 Atg8乙酰化与去乙酰化修饰载体转染细胞 | 第40-41页 |
| 2.7 WB检测Atg8乙酰化与去乙酰化修饰对家蚕Bm N细胞自噬的影响 | 第41页 |
| 2.8 家蚕细胞最佳DALGreen工作液浓度的探究 | 第41页 |
| 2.9 Atg8乙酰化与去乙酰化修饰对家蚕细胞自噬影响的观察 | 第41-42页 |
| 3. 结果 | 第42-48页 |
| 3.1 EBSS诱导的细胞自噬模型观测 | 第42页 |
| 3.2 模拟Bm Atg8乙酰化、去乙酰化瞬时表达载体的构建与鉴定 | 第42-44页 |
| 3.3 m Cherry融合的乙酰化与去乙酰化Bm Atg8瞬时表达载体的构建 | 第44-45页 |
| 3.4 K13位点乙酰化修饰的分子验证 | 第45-46页 |
| 3.5 Atg8乙酰化与去乙酰化修饰对家蚕Bm N细胞自噬的影响 | 第46页 |
| 3.6 在家蚕细胞中检测不同浓度DALGreen工作液效果 | 第46-47页 |
| 3.7 Atg8乙酰化与去乙酰化修饰对家蚕Bm N细胞自噬的观察 | 第47-48页 |
| 4 讨论 | 第48-49页 |
| 第五章 家蚕Atg8乙酰化突变修饰对家蚕细胞凋亡的影响 | 第49-55页 |
| 1. 材料与试剂 | 第49页 |
| 1.1 细胞、菌株及质粒 | 第49页 |
| 1.2 试剂 | 第49页 |
| 2. 方法 | 第49-51页 |
| 2.1 家蚕细胞凋亡模型的建立 | 第49页 |
| 2.2 转染质粒后家蚕细胞凋亡的诱导 | 第49-50页 |
| 2.3 ELISA检测细胞凋亡 | 第50页 |
| 2.4 流式检测细胞凋亡 | 第50-51页 |
| 3. 实验结果 | 第51-53页 |
| 3.1 细胞凋亡模型的检测 | 第51页 |
| 3.2 DNA片段化检测细胞凋亡 | 第51-52页 |
| 3.3 流式细胞术检测细胞凋亡 | 第52-53页 |
| 4. 讨论 | 第53-55页 |
| 结论 | 第55-56页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
