蜡蚧菌对甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂的抗性改良及效果评价
| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 第一章 引言 | 第14-21页 |
| 1.1 蜡蚧菌的生物防治作用 | 第14页 |
| 1.2 甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂抗性研究进展 | 第14-18页 |
| 1.2.1 甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂抗性发生现状 | 第14-15页 |
| 1.2.2 甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂抗性机制 | 第15-17页 |
| 1.2.3 甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂抗性治理 | 第17-18页 |
| 1.3 抗药性的利用 | 第18-19页 |
| 1.3.1 负交互抗性的利用 | 第18页 |
| 1.3.2 抗药性基因的利用 | 第18-19页 |
| 1.4 研究目的、内容及技术路线 | 第19-21页 |
| 1.4.1 研究目的 | 第19页 |
| 1.4.2 研究内容 | 第19-20页 |
| 1.4.3 技术路线 | 第20-21页 |
| 第二章 醚菌酯抗性菌株筛选 | 第21-29页 |
| 2.1 实验材料 | 第21页 |
| 2.1.1 供试药剂 | 第21页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第21页 |
| 2.1.3 主要培养基 | 第21页 |
| 2.1.4 主要实验仪器 | 第21页 |
| 2.1.5 引物 | 第21页 |
| 2.2 试验方法 | 第21-24页 |
| 2.2.1 样品采集 | 第21-22页 |
| 2.2.2 菌株分离与纯化 | 第22页 |
| 2.2.3 菌株药剂敏感性测定 | 第22-23页 |
| 2.2.4 菌株分子鉴定 | 第23-24页 |
| 2.2.5 数据分析 | 第24页 |
| 2.3 结果与分析 | 第24-28页 |
| 2.3.1 菌株药剂敏感性测定 | 第24-27页 |
| 2.3.2 菌株分子鉴定 | 第27-28页 |
| 2.4 讨论 | 第28-29页 |
| 第三章 抗性目的基因克隆 | 第29-40页 |
| 3.1 实验材料 | 第29-30页 |
| 3.1.1 供试菌株及质粒 | 第29页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第29页 |
| 3.1.3 常用培养基配制 | 第29页 |
| 3.1.4 常用试剂配制 | 第29页 |
| 3.1.5 实验仪器 | 第29页 |
| 3.1.6 引物 | 第29-30页 |
| 3.2 试验方法 | 第30-34页 |
| 3.2.1 枝孢菌菌株RNA提取 | 第30页 |
| 3.2.2 反转录cDNA第一链的合成 | 第30-31页 |
| 3.2.3 枝孢菌菌株Cytb抗性基因克隆 | 第31-33页 |
| 3.2.4 枝孢菌菌株Cytb抗性基因TA克隆 | 第33-34页 |
| 3.3 结果与分析 | 第34-39页 |
| 3.3.1 枝孢菌菌株RNA提取 | 第34-35页 |
| 3.3.2 PCR扩增第一阶段 | 第35页 |
| 3.3.3 PCR扩增第二阶段 | 第35-36页 |
| 3.3.4 PCR扩增第三阶段 | 第36页 |
| 3.3.5 PCR扩增Cytb基因全长序列 | 第36-37页 |
| 3.3.6 枝孢菌菌株Cytb抗性基因TA克隆 | 第37页 |
| 3.3.7 测序结果 | 第37-39页 |
| 3.4 讨论 | 第39-40页 |
| 第四章 表达载体构建 | 第40-48页 |
| 4.1 实验材料 | 第40-41页 |
| 4.1.1 供试菌株及质粒 | 第40页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第40页 |
| 4.1.3 主要培养基 | 第40页 |
| 4.1.4 实验仪器 | 第40页 |
| 4.1.5 引物 | 第40-41页 |
| 4.2 试验方法 | 第41-44页 |
| 4.2.1 表达载体构建示意图 | 第41页 |
| 4.2.2 目的基因引物设计 | 第41-42页 |
| 4.2.3 质粒的小量提取 | 第42页 |
| 4.2.4 目的基因的连接 | 第42-43页 |
| 4.2.5 构建表达载体 | 第43-44页 |
| 4.2.6 双酶切验证重组质粒 | 第44页 |
| 4.3 结果与分析 | 第44-47页 |
| 4.3.1 目的基因克隆 | 第44-45页 |
| 4.3.2 目的基因连接 | 第45-46页 |
| 4.3.3 菌落PCR验证重组质粒 | 第46页 |
| 4.3.4 双酶切验证重组质粒 | 第46-47页 |
| 4.4 讨论 | 第47-48页 |
| 第五章 农杆菌介导转化蜡蚧菌 | 第48-58页 |
| 5.1 实验材料 | 第48-49页 |
| 5.1.1 供试菌株及质粒 | 第48页 |
| 5.1.2 供试药剂 | 第48页 |
| 5.1.3 主要试剂 | 第48页 |
| 5.1.4 主要培养基 | 第48页 |
| 5.1.5 实验仪器 | 第48-49页 |
| 5.1.6 引物 | 第49页 |
| 5.2 试验方法 | 第49-52页 |
| 5.2.1 蜡蚧菌菌株分子鉴定 | 第49页 |
| 5.2.2 农杆菌转化 | 第49-50页 |
| 5.2.3 农杆菌介导蜡蚧菌转化 | 第50页 |
| 5.2.4 转化菌株的验证 | 第50-52页 |
| 5.3 结果与分析 | 第52-56页 |
| 5.3.1 蜡蚧菌菌株分子鉴定 | 第52-53页 |
| 5.3.2 农杆菌转化 | 第53页 |
| 5.3.3 农杆菌介导转化蜡蚧菌 | 第53-54页 |
| 5.3.4 转化子DNA验证 | 第54-55页 |
| 5.3.5 转化子RT-PCR验证 | 第55-56页 |
| 5.3.6 转化子遗传稳定性鉴定 | 第56页 |
| 5.3.7 转化子醚菌酯抗药性测定 | 第56页 |
| 5.4 讨论 | 第56-58页 |
| 第六章 全文结论与讨论 | 第58-60页 |
| 6.1 结论 | 第58页 |
| 6.2 讨论 | 第58-59页 |
| 6.3 创新点与意义 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-65页 |
| 附录 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 作者简历 | 第67页 |
