摘要 | 第3-5页 |
ABSTRACT | 第5-6页 |
符号说明 | 第9-10页 |
第一章 类核相关蛋白研究进展(文献综述) | 第10-18页 |
1.1 前言 | 第10页 |
1.2 类核概述 | 第10-11页 |
1.3 类核相关蛋白概述 | 第11-12页 |
1.3.1 类核相关蛋白的发现 | 第11-12页 |
1.3.2 类核相关蛋白分布特性 | 第12页 |
1.4 类核相关蛋白生物学功能 | 第12-18页 |
1.4.1 类核相关蛋白影响基因序列变异 | 第12-13页 |
1.4.2 类核相关蛋白参与突变修复 | 第13-14页 |
1.4.3 类核相关蛋白与DNA结构 | 第14-15页 |
1.4.4 类核相关蛋白与基因组转录 | 第15-16页 |
1.4.5 类核相关蛋白与染色体复制起始 | 第16页 |
1.4.6 Fis、IHF蛋白与DARS2准时结合调节ATP-Dna A的产生和染色体复制起始 | 第16-18页 |
第二章 大肠杆菌H-NS、IHF和Dna A影响类核组织结构 | 第18-74页 |
2.1 引言 | 第18-25页 |
2.1.1 大肠杆菌染色体 | 第18-20页 |
2.1.2 影响染色体构型的蛋白 | 第20-23页 |
2.1.3 影响染色体构型的其他因素(非蛋白质因素) | 第23-24页 |
2.1.4 研究目的与意义 | 第24-25页 |
2.2 实验材料 | 第25-35页 |
2.2.1 菌种和质粒 | 第25-26页 |
2.2.2 引物 | 第26-28页 |
2.2.3 主要仪器与设备 | 第28页 |
2.2.4 主要试剂来源 | 第28页 |
2.2.5 培养基 | 第28-30页 |
2.2.6 实验试剂 | 第30-35页 |
2.3 实验方法 | 第35-48页 |
2.3.1 过表达质粒的构建 | 第35-37页 |
2.3.2 缺失突变体的构建 | 第37-38页 |
2.3.3 感受态细胞的制备 | 第38-39页 |
2.3.4 转化 | 第39页 |
2.3.5 细胞倍增时间(doubling time)的测定 | 第39-40页 |
2.3.6 显微镜观察细胞 | 第40-41页 |
2.3.7 流式细胞仪分析 | 第41页 |
2.3.8 P1转导 | 第41-43页 |
2.3.9 Western blot分析 | 第43-45页 |
2.3.10 免疫共沉淀实验 | 第45-46页 |
2.3.11 细菌双杂交质粒的构建 | 第46页 |
2.3.12 细菌双杂交试验 | 第46-48页 |
2.4 实验结果 | 第48-72页 |
2.4.1 H-NS影响细胞类核组织结构 | 第48-52页 |
2.4.1.1 ?hns突变菌株的构建 | 第48-49页 |
2.4.1.2 H-NS影响细胞类核 | 第49-50页 |
2.4.1.3 质粒过表达H-NS使细胞变大 | 第50-51页 |
2.4.1.4 hns基因缺失减缓细胞生长 | 第51-52页 |
2.4.2 IHF影响细胞类核组织结构 | 第52-58页 |
2.4.2.1 ?hip突变菌株的鉴定和?him A的构建 | 第52-53页 |
2.4.2.2 IHF影响细胞类核 | 第53-55页 |
2.4.2.3 LB培养基中him A缺失使细胞变小 | 第55页 |
2.4.2.4 ABTGcasa培养基中质粒过表达IHF-A使细胞变大 | 第55-56页 |
2.4.2.5 him A基因缺失减缓细胞生长 | 第56-57页 |
2.4.2.6 hip基因缺失不改变细胞大小 | 第57页 |
2.4.2.7 hip基因缺失减缓细胞生长 | 第57-58页 |
2.4.3 hns、him A、dna A单突变影响类核结构 | 第58-63页 |
2.4.3.1 hns、him A、dna A单突变影响细胞类核 | 第58-59页 |
2.4.3.2hns、him A、dna A单突变改变细胞大小 | 第59-60页 |
2.4.3.3hns、him A、dna A单突变改变细胞倍增时间 | 第60-61页 |
2.4.3.4hns、him A、dna A单突变影响染色体复制起始 | 第61-63页 |
2.4.4 双突变影响类核结构 | 第63-68页 |
2.4.4.1 双突变影响细胞类核 | 第63-64页 |
2.4.4.2 双突变改变细胞大小 | 第64-66页 |
2.4.4.3 双突变改变细胞倍增时间 | 第66页 |
2.4.4.4 双突变影响染色体复制起始 | 第66-68页 |
2.4.5 FLAG pull-down技术捕获可能与Dna A相互作用的蛋白 | 第68-72页 |
2.4.5.1 鉴定Dna A-FLAG菌株 | 第68-69页 |
2.4.5.2 SDS-PAGE检测Dna A相互作用蛋白 | 第69页 |
2.4.5.3 质谱鉴定免疫共沉淀产物 | 第69-71页 |
2.4.5.4 Dna A与Fts K有相互作用 | 第71-72页 |
2.5 讨论 | 第72-74页 |
2.5.1 H-NS、IHF是细胞类核组织者 | 第72页 |
2.5.2 Dna A蛋白也是细胞类核组织者 | 第72-74页 |
参考文献 | 第74-80页 |
致谢 | 第80页 |