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大肠杆菌H-NS、IHF和DnaA蛋白影响类核组织结构

摘要第3-5页
ABSTRACT第5-6页
符号说明第9-10页
第一章 类核相关蛋白研究进展(文献综述)第10-18页
    1.1 前言第10页
    1.2 类核概述第10-11页
    1.3 类核相关蛋白概述第11-12页
        1.3.1 类核相关蛋白的发现第11-12页
        1.3.2 类核相关蛋白分布特性第12页
    1.4 类核相关蛋白生物学功能第12-18页
        1.4.1 类核相关蛋白影响基因序列变异第12-13页
        1.4.2 类核相关蛋白参与突变修复第13-14页
        1.4.3 类核相关蛋白与DNA结构第14-15页
        1.4.4 类核相关蛋白与基因组转录第15-16页
        1.4.5 类核相关蛋白与染色体复制起始第16页
        1.4.6 Fis、IHF蛋白与DARS2准时结合调节ATP-Dna A的产生和染色体复制起始第16-18页
第二章 大肠杆菌H-NS、IHF和Dna A影响类核组织结构第18-74页
    2.1 引言第18-25页
        2.1.1 大肠杆菌染色体第18-20页
        2.1.2 影响染色体构型的蛋白第20-23页
        2.1.3 影响染色体构型的其他因素(非蛋白质因素)第23-24页
        2.1.4 研究目的与意义第24-25页
    2.2 实验材料第25-35页
        2.2.1 菌种和质粒第25-26页
        2.2.2 引物第26-28页
        2.2.3 主要仪器与设备第28页
        2.2.4 主要试剂来源第28页
        2.2.5 培养基第28-30页
        2.2.6 实验试剂第30-35页
    2.3 实验方法第35-48页
        2.3.1 过表达质粒的构建第35-37页
        2.3.2 缺失突变体的构建第37-38页
        2.3.3 感受态细胞的制备第38-39页
        2.3.4 转化第39页
        2.3.5 细胞倍增时间(doubling time)的测定第39-40页
        2.3.6 显微镜观察细胞第40-41页
        2.3.7 流式细胞仪分析第41页
        2.3.8 P1转导第41-43页
        2.3.9 Western blot分析第43-45页
        2.3.10 免疫共沉淀实验第45-46页
        2.3.11 细菌双杂交质粒的构建第46页
        2.3.12 细菌双杂交试验第46-48页
    2.4 实验结果第48-72页
        2.4.1 H-NS影响细胞类核组织结构第48-52页
            2.4.1.1 ?hns突变菌株的构建第48-49页
            2.4.1.2 H-NS影响细胞类核第49-50页
            2.4.1.3 质粒过表达H-NS使细胞变大第50-51页
            2.4.1.4 hns基因缺失减缓细胞生长第51-52页
        2.4.2 IHF影响细胞类核组织结构第52-58页
            2.4.2.1 ?hip突变菌株的鉴定和?him A的构建第52-53页
            2.4.2.2 IHF影响细胞类核第53-55页
            2.4.2.3 LB培养基中him A缺失使细胞变小第55页
            2.4.2.4 ABTGcasa培养基中质粒过表达IHF-A使细胞变大第55-56页
            2.4.2.5 him A基因缺失减缓细胞生长第56-57页
            2.4.2.6 hip基因缺失不改变细胞大小第57页
            2.4.2.7 hip基因缺失减缓细胞生长第57-58页
        2.4.3 hns、him A、dna A单突变影响类核结构第58-63页
            2.4.3.1 hns、him A、dna A单突变影响细胞类核第58-59页
            2.4.3.2hns、him A、dna A单突变改变细胞大小第59-60页
            2.4.3.3hns、him A、dna A单突变改变细胞倍增时间第60-61页
            2.4.3.4hns、him A、dna A单突变影响染色体复制起始第61-63页
        2.4.4 双突变影响类核结构第63-68页
            2.4.4.1 双突变影响细胞类核第63-64页
            2.4.4.2 双突变改变细胞大小第64-66页
            2.4.4.3 双突变改变细胞倍增时间第66页
            2.4.4.4 双突变影响染色体复制起始第66-68页
        2.4.5 FLAG pull-down技术捕获可能与Dna A相互作用的蛋白第68-72页
            2.4.5.1 鉴定Dna A-FLAG菌株第68-69页
            2.4.5.2 SDS-PAGE检测Dna A相互作用蛋白第69页
            2.4.5.3 质谱鉴定免疫共沉淀产物第69-71页
            2.4.5.4 Dna A与Fts K有相互作用第71-72页
    2.5 讨论第72-74页
        2.5.1 H-NS、IHF是细胞类核组织者第72页
        2.5.2 Dna A蛋白也是细胞类核组织者第72-74页
参考文献第74-80页
致谢第80页

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