| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 缩略词对照表 | 第15-17页 |
| 第一章 绪论 | 第17-40页 |
| 1.1 毒蘑菇物种及其毒素多样性 | 第17-21页 |
| 1.1.1 毒蘑菇的物种多样性 | 第17-18页 |
| 1.1.2 毒蘑菇毒素多样性 | 第18-21页 |
| 1.2 鹅膏菌属分类及其毒素研究概况 | 第21-35页 |
| 1.2.1 鹅膏菌属资源多样性及分类概况 | 第21页 |
| 1.2.2 鹅膏环肽类毒素的种类多样性 | 第21-24页 |
| 1.2.3 鹅膏菌中环性毒肽的检测方法 | 第24-26页 |
| 1.2.4 鹅膏毒素中毒后的治疗 | 第26-28页 |
| 1.2.5 鹅膏环肽类毒素的特点及生物学活性 | 第28-29页 |
| 1.2.6 鹅膏毒素编码基因的研究 | 第29-33页 |
| 1.2.7 鹅膏菌毒素的核糖体生物合成 | 第33-35页 |
| 1.3 致命鹅膏的研究进展 | 第35-37页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第37-40页 |
| 1.4.1 获得致命鹅膏主要毒素编码基因，为毒素的克隆表达奠定研究基础 | 第37-38页 |
| 1.4.2 使用 qRT-PCR 技术揭示α-AMA 在致命鹅膏菌中的表达规律 | 第38页 |
| 1.4.3 对致命鹅膏菌进行 de novo 转录组测序，首次揭示其转录组特征 | 第38页 |
| 1.4.4 探究毒素基因家族成员多样性和进化关系，丰富真菌多样性的内涵 | 第38-40页 |
| 第二章 致命鹅膏菌α-AMA 和 PHA 的 cDNA 全长序列的克隆和序列分析 | 第40-55页 |
| 2.1 引言 | 第40页 |
| 2.2 材料与方法 | 第40-50页 |
| 2.2.1 致命鹅膏材料收集和 RNA 提取 | 第40-42页 |
| 2.2.2 α-AMA 和 PHA 的 3′RACE 扩增 | 第42-45页 |
| 2.2.3 PCR 产物回收，感受态细胞的制备，克隆及测序 | 第45-47页 |
| 2.2.4 5′RACE 反应 | 第47-49页 |
| 2.2.5 序列分析 | 第49-50页 |
| 2.3 结果 | 第50-52页 |
| 2.3.1 致命鹅膏中α-AMA 和 PHA 的 cDNA 全长序列的克隆和分析 | 第50-51页 |
| 2.3.2 基因组 DNA 扩增 | 第51-52页 |
| 2.4 讨论 | 第52-54页 |
| 2.4.1 双孢鹅膏和致命鹅膏的主要毒素编码基因序列比较 | 第52-53页 |
| 2.4.2 鹅膏菌属中α-AMA 和 PHA 序列的保守性 | 第53-54页 |
| 2.5 本章小结 | 第54-55页 |
| 第三章 致命鹅膏菌的不同生长时期和部位中α-AMA 的表达差异分析 | 第55-70页 |
| 3.1 引言 | 第55-56页 |
| 3.2 材料与方法 | 第56-60页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第56页 |
| 3.2.2 试剂及仪器 | 第56页 |
| 3.2.3 内参基因的筛选 | 第56-58页 |
| 3.2.4 qRT-PCR 技术检测致命鹅膏中α-AMA 表达 | 第58-60页 |
| 3.3 结果 | 第60-65页 |
| 3.3.1 各内参引物的扩增检测 | 第60-61页 |
| 3.3.2 各内参引物及α-AMA 引物的扩增效率计算 | 第61-62页 |
| 3.3.3 内参引物在不同组织和生长时期的表达水平稳定性 | 第62-63页 |
| 3.3.4 β-actin 与α-AMA 引物的扩增效率的再次评估 | 第63-64页 |
| 3.3.5 致命鹅膏中α-AMA 在不同部位的 qRT-PCR 检测 | 第64页 |
| 3.3.6 致命鹅膏中α-AMA 在不同生长时期各部位的表达水平检测 | 第64-65页 |
| 3.4 讨论 | 第65-68页 |
| 3.4.1 RNA 的质量评定 | 第65-66页 |
| 3.4.2 内参引物的扩增能力、扩增效率和扩增稳定性评估 | 第66页 |
| 3.4.3 致命鹅膏中α-AMA 转录本的表达水平与生长旺盛程度的相关性 | 第66-67页 |
| 3.4.4 鹅膏肽类毒素在子实体的不同部位和生长阶段中的积累 | 第67-68页 |
| 3.5 本章小结 | 第68-70页 |
| 第四章 致命鹅膏菌子实体的转录组数据分析 | 第70-92页 |
| 4.1 引言 | 第70-71页 |
| 4.2 材料和方法 | 第71-75页 |
| 4.2.1 样品准备和 RNA 提取 | 第71页 |
| 4.2.2 cDNA 文库的构建和 Illumina 测序 | 第71页 |
| 4.2.3 de novo 转录组组装和注释 | 第71-72页 |
| 4.2.4 cDNA 全长序列的预测 | 第72页 |
| 4.2.5 SSR 序列分析 | 第72页 |
| 4.2.6 在转录组数据中搜索鹅膏肽类毒素相关基因 | 第72-74页 |
| 4.2.7 编码主要毒素的基因家族序列的验证 | 第74页 |
| 4.2.8 前体蛋白序列的聚类分析 | 第74-75页 |
| 4.3 结果 | 第75-87页 |
| 4.3.1 致命鹅膏菌转录组数据的组装 | 第75-77页 |
| 4.3.2 功能注释 | 第77-81页 |
| 4.3.3 转录组中毒素和毒素相关肽类的编码基因分析 | 第81-83页 |
| 4.3.4 主要毒素编码基因的证实 | 第83-84页 |
| 4.3.5 鹅膏毒素基因中的多态性分析 | 第84-85页 |
| 4.3.6 SSR 分析 | 第85-86页 |
| 4.3.7 鹅膏肽类序列比较和聚类分析 | 第86-87页 |
| 4.4 讨论 | 第87-90页 |
| 4.4.1 致命鹅膏菌的转录组数据 | 第87-88页 |
| 4.4.2 编码毒素和毒素相关肽类的基因 | 第88-89页 |
| 4.4.3 鹅膏毒素和相关的肽类成分 | 第89页 |
| 4.4.4 POPB 在剧毒鹅膏种类中的高度保守性 | 第89-90页 |
| 4.5 本章小结 | 第90-92页 |
| 第五章 剧毒鹅膏种类中的毒素基因多样性 | 第92-112页 |
| 5.1 引言 | 第92-93页 |
| 5.2 材料和方法 | 第93-97页 |
| 5.2.1 剧毒鹅膏标本的收集 | 第93-95页 |
| 5.2.2 DNA 提取，PCR 扩增和 ITS 区域的测序 | 第95-96页 |
| 5.2.3 鹅膏毒素基因家族成员的 PCR 扩增和克隆测序 | 第96页 |
| 5.2.4 α-AMA 和 PHA 的选择压力的检测和聚类分析 | 第96-97页 |
| 5.3 结果 | 第97-106页 |
| 5.3.1 毒素和毒素相关的肽类 | 第97-102页 |
| 5.3.2 成簇和聚类分析 | 第102-106页 |
| 5.4 讨论 | 第106-110页 |
| 5.4.1 剧毒鹅膏中 MSDIN 家族成员的多样性 | 第106-107页 |
| 5.4.2 基因变异性位点和密码子的偏好性 | 第107-108页 |
| 5.4.3 未知功能的肽类的预测 | 第108页 |
| 5.4.4 主要毒素序列的聚类分析 | 第108-110页 |
| 5.5 本章小结 | 第110-112页 |
| 结论与展望 | 第112-117页 |
| 结论 | 第112-114页 |
| 创新点 | 第114-115页 |
| 展望 | 第115-117页 |
| 参考文献 | 第117-136页 |
| 附录 | 第136-139页 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 | 第139-140页 |
| 致谢 | 第140-141页 |
| 附件 | 第141页 |
