| 中文摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 缩略语/符号说明 | 第12-14页 |
| 前言 | 第14-17页 |
| 研究现状、成果 | 第14-16页 |
| 研究目的、方法 | 第16-17页 |
| 一、hiPSCs饲养层培养和无饲养层培养体系的建立及比较 | 第17-31页 |
| 1.1 材料和方法 | 第18-25页 |
| 1.1.1 细胞来源 | 第18页 |
| 1.1.2 实验耗材 | 第18页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第18页 |
| 1.1.4 主要实验试剂 | 第18-19页 |
| 1.1.5 主要试剂配制 | 第19-20页 |
| 1.1.6 hiPSCs饲养层培养 | 第20-23页 |
| 1.1.7 hiPSCs无饲养层培养 | 第23-24页 |
| 1.1.8 hiPSCs的表型鉴定 | 第24-25页 |
| 1.2 结果 | 第25-27页 |
| 1.2.1 饲养层和无饲养层培养的hiPSCs镜下观察 | 第25页 |
| 1.2.2 无饲养层培养hiPSCs碱性磷酸酶染色结果 | 第25-27页 |
| 1.2.3 hiPSCsOCT4免疫荧光染色 | 第27页 |
| 1.3 讨论 | 第27-29页 |
| 1.3.1 hiPSCs的饲养层培养 | 第27-28页 |
| 1.3.2 hiPSCs的无饲养层培养 | 第28-29页 |
| 1.3.3 hiPSCs的多能性鉴定 | 第29页 |
| 1.4 小结 | 第29-31页 |
| 二、hiPSCs向肝细胞诱导方法的确立 | 第31-47页 |
| 2.1 材料和方法 | 第31-36页 |
| 2.1.1 细胞来源 | 第31页 |
| 2.1.2 主要实验试剂 | 第31-32页 |
| 2.1.3 主要实验耗材 | 第32页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第32页 |
| 2.1.5 拟胚体的制备 | 第32-33页 |
| 2.1.6 拟胚体向定型内胚层细胞诱导 | 第33-34页 |
| 2.1.7 定型内胚层细胞向肝细胞诱导 | 第34页 |
| 2.1.8 肝细胞诱导成熟 | 第34页 |
| 2.1.9 诱导生成肝细胞表型鉴定 | 第34-35页 |
| 2.1.10 hiPSCs向肝细胞诱导效率检测 | 第35页 |
| 2.1.11 诱导生成肝细胞功能检测 | 第35-36页 |
| 2.2 结果 | 第36-42页 |
| 2.2.1 hiPSCs向肝细胞的阶段诱导 | 第36页 |
| 2.2.2 拟胚体的形成 | 第36-37页 |
| 2.2.3 定型内胚层阶段细胞形态 | 第37-38页 |
| 2.2.4 定型内胚层向肝前体细胞诱导结束时细胞形态 | 第38-39页 |
| 2.2.5 诱导完成后肝细胞形态 | 第39页 |
| 2.2.6 诱导完成后肝细胞表型鉴定 | 第39-40页 |
| 2.2.7 流式细胞仪检测ASGPR1表达阳性细胞比率 | 第40-42页 |
| 2.2.8 诱导完成后肝细胞功能检测 | 第42页 |
| 2.3 讨论 | 第42-46页 |
| 2.3.1 肝脏的的胚胎发育过程 | 第42-43页 |
| 2.3.2 ESCs/iPSCs向肝细胞的自然分化 | 第43页 |
| 2.3.3 阶段诱导法诱导ESCs/iPSCs向肝细胞分化 | 第43-45页 |
| 2.3.4 拟胚体的制作 | 第45-46页 |
| 2.3.5 诱导生成肝细胞功能鉴定 | 第46页 |
| 2.4 小结 | 第46-47页 |
| 三、肝切除患者血清对hiPS Cs向肝细胞诱导的影响 | 第47-72页 |
| 3.1 材料和方法 | 第47-57页 |
| 3.1.1 细胞来源 | 第47页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第47-48页 |
| 3.1.3 主要实验耗材 | 第48页 |
| 3.1.4 主要仪器 | 第48-49页 |
| 3.1.5 患者血清的采集 | 第49页 |
| 3.1.6 主要试剂配制 | 第49-50页 |
| 3.1.7 原代肝细胞的分离和纯化 | 第50页 |
| 3.1.8 实验分组 | 第50页 |
| 3.1.9 不同血清诱导hiPSCs向肝细胞分化方法 | 第50页 |
| 3.1.10 各组诱导生成肝细胞形态学观察比较 | 第50-51页 |
| 3.1.11 流式细胞仪检测各组诱导生成肝细胞比率 | 第51页 |
| 3.1.12 FlowSight流式细胞仪检测各组肝细胞ALB及AFP表达率 | 第51页 |
| 3.1.13 免疫荧光法检测各组细胞ALB及AFP表达情况 | 第51页 |
| 3.1.14 各组诱导生成肝细胞白蛋白分泌及尿素合成功能检测 | 第51-53页 |
| 3.1.15 各组诱导生成肝细胞糖原染色 | 第53页 |
| 3.1.16 各组诱导生成肝细胞吲哚青绿摄取功能检测 | 第53页 |
| 3.1.17 各组诱导生成肝细胞细胞色素P450mRNA表达水平检测 | 第53-57页 |
| 3.1.18 统计学方法 | 第57页 |
| 3.2 结果 | 第57-67页 |
| 3.2.1 不同血清诱导生成细胞形态学比较 | 第57页 |
| 3.2.2 不同血清诱导效率的比较 | 第57-58页 |
| 3.2.3 不同血清诱导生成肝细胞ALB、AFP表达情况比较 | 第58-59页 |
| 3.2.4 不同血清诱导生成肝细胞PAS染色情况比较 | 第59页 |
| 3.2.5 不同血清诱导生成肝细胞ICG摄取功能比较 | 第59-61页 |
| 3.2.6 不同血清诱导生成肝细胞ALB分泌功能和尿素合成功能比较 | 第61-65页 |
| 3.2.7 不同血清诱导生成肝细胞CYP450mRNA测定 | 第65-67页 |
| 3.3 讨论 | 第67-71页 |
| 3.3.1 FBS作为细胞培养及分化添加物所面临的问题 | 第67页 |
| 3.3.2 无血清培养基在干细胞培养和分化中的应用 | 第67-68页 |
| 3.3.3 人源性血清在细胞培养及分化中的应用 | 第68页 |
| 3.3.4 肝切除术后血清成分的变化 | 第68-70页 |
| 3.3.5 肝细胞表型鉴定及功能评估 | 第70-71页 |
| 3.4 小结 | 第71-72页 |
| 四、肝切除患者血清对HL-7702细胞增殖能力的影响 | 第72-79页 |
| 4.1 材料和方法 | 第72-73页 |
| 4.1.1 主要试剂 | 第72页 |
| 4.1.2 主要实验耗材 | 第72页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第72-73页 |
| 4.1.4 患者血清的采集 | 第73页 |
| 4.1.5 HL-7702细胞培养液的配制 | 第73页 |
| 4.1.6 Cell-IQ无标记活细胞影像分析系统细胞增殖观察 | 第73页 |
| 4.1.7 BrdU免疫荧光染色 | 第73页 |
| 4.2 结果 | 第73-76页 |
| 4.2.1 不同血清培养条件下HL-7702细胞增殖情况比较 | 第73-74页 |
| 4.2.2 不同血清培养条件下HL-7702细胞BrdU增殖实验 | 第74-76页 |
| 4.3 讨论 | 第76-78页 |
| 4.3.1 人源性血清较FBS促进肝细胞增殖作用更强 | 第76-77页 |
| 4.3.2 肝切除术后早期血清较术前血清促进肝细胞增殖作用更强 | 第77-78页 |
| 4.4 小结 | 第78-79页 |
| 全文结论 | 第79-80页 |
| 论文创新点 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-90页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第90-91页 |
| 综述 ES/iPS细胞向肝细胞诱导分化研究进展 | 第91-102页 |
| 综述参考文献 | 第98-102页 |
| 致谢 | 第102页 |
