| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 1 引言 | 第14-20页 |
| 1.1 抗菌肽简介 | 第14页 |
| 1.2 防御素的研究进展 | 第14-16页 |
| 1.2.1 防御素的定义 | 第14页 |
| 1.2.2 防御素的结构特征与分类 | 第14-16页 |
| 1.2.3 防御素的应用 | 第16页 |
| 1.3 禽AvBDs的研究进展 | 第16-18页 |
| 1.3.1 禽AvBDs的结构特征 | 第16-17页 |
| 1.3.2 禽AvBDs重组蛋白的制备 | 第17页 |
| 1.3.3 禽AvBDs的生物学特性 | 第17页 |
| 1.3.4 禽AvBDs的组织分布 | 第17-18页 |
| 1.3.5 禽AvBDs的诱导表达 | 第18页 |
| 1.4 Toll样受体的研究进展 | 第18-19页 |
| 1.5 研究目的与意义 | 第19-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-35页 |
| 2.1 材料 | 第20-22页 |
| 2.1.1 菌株及质粒载体 | 第20页 |
| 2.1.2 药品、试剂及配制 | 第20-21页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第21-22页 |
| 2.2 鸽β-防御素基因的克隆与序列分析 | 第22-25页 |
| 2.2.1 实验用动物及组织样品的采集 | 第22页 |
| 2.2.2 组织总RNA的提取 | 第22页 |
| 2.2.3 反转录聚合酶链式反应(RT-PCR) | 第22-23页 |
| 2.2.4 RT-PCR产物的回收 | 第23页 |
| 2.2.5 PCR产物的连接 | 第23-24页 |
| 2.2.6 感受态细胞的制备 | 第24页 |
| 2.2.7 连接产物的转化 | 第24页 |
| 2.2.8 碱裂解法质粒的提取 | 第24-25页 |
| 2.2.9 重组质粒的PCR鉴定与测序 | 第25页 |
| 2.2.10 基因序列分析及同源性比较 | 第25页 |
| 2.3 重组鸽β-防御素蛋白的原核表达 | 第25-30页 |
| 2.3.1 原核表达载体的构建 | 第25-28页 |
| 2.3.2 重组鸽β-防御素蛋白的诱导表达 | 第28-29页 |
| 2.3.3 重组鸽β-防御素蛋白的纯化 | 第29-30页 |
| 2.4 重组鸽β-防御素蛋白的抗菌活性测定 | 第30-31页 |
| 2.5 不同NaCl浓度对鸽β-防御素重组蛋白抗菌活性影响 | 第31页 |
| 2.6 重组鸽β-防御素蛋白的溶血试验 | 第31页 |
| 2.7 重组鸽β-防御素蛋白体外抗病毒活性的测定 | 第31-32页 |
| 2.7.1 毒株及实验动物 | 第31页 |
| 2.7.2 鸡胚接种实验 | 第31-32页 |
| 2.7.3 病毒TCID50测定 | 第32页 |
| 2.8 检测鸽β-防御素及TLRs经新城疫病毒诱导后的组织表达差异 | 第32-34页 |
| 2.8.1 实验用动物及组织样品的采集 | 第32-33页 |
| 2.8.2 荧光定量引物的设计 | 第33页 |
| 2.8.3 荧光定量标准品的制备 | 第33-34页 |
| 2.8.4 样品组织cDNA的制备 | 第34页 |
| 2.8.5 鸽AvBDs及TLRs基因的检测 | 第34页 |
| 2.9 数据统计分析 | 第34-35页 |
| 3 结果与分析 | 第35-55页 |
| 3.1 鸽β-防御素基因的克隆 | 第35-36页 |
| 3.2 重组质粒的鉴定 | 第36页 |
| 3.3 测序结果及分析 | 第36-37页 |
| 3.4 鸽β-防御素基因的遗传进化分析 | 第37-40页 |
| 3.5 重组鸽β-防御素蛋白的原核表达 | 第40-43页 |
| 3.5.1 表达用重组表达质粒pMD18-T-Pigeon AvBDs鉴定 | 第40-41页 |
| 3.5.2 重组表达质粒pProEX-pigeon AvBDs的鉴定 | 第41-42页 |
| 3.5.3 重组鸽β-防御素蛋白的原核表达与纯化 | 第42-43页 |
| 3.6 重组鸽β-防御素及His标签蛋白的抗菌活性 | 第43-46页 |
| 3.7 不同NaCl浓度对鸽β-防御素重组蛋白抗菌活性的影响 | 第46-47页 |
| 3.8 重组鸽β-防御素蛋白的溶血试验 | 第47页 |
| 3.9 重组鸽β-防御素蛋白的抗病毒活性 | 第47-48页 |
| 3.10 经新城疫病毒诱导后,鸽β-防御素及TLRs在鸽组织器官中表达差异 | 第48-55页 |
| 4 讨论 | 第55-60页 |
| 4.1 鸽β-防御素基因克隆与遗传进化分析 | 第55页 |
| 4.2 重组鸽β-防御素融合蛋白的原核表达 | 第55-56页 |
| 4.3 重组鸽β-防御素蛋白的生物学特性 | 第56-57页 |
| 4.3.1 重组鸽AvBDs及His标签蛋白的抗菌活性 | 第56-57页 |
| 4.3.2 不同NaCl浓度对鸽AvBDs重组蛋白抗菌活性的影响 | 第57页 |
| 4.3.3 重组鸽β-防御素蛋白的溶血活性 | 第57页 |
| 4.3.4 重组鸽β-防御素蛋白抗病毒活性 | 第57页 |
| 4.4 鸽β-防御素及TLRs经新城疫诱导后的组织表达差异 | 第57-60页 |
| 5 结论 | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-70页 |
| 附录 | 第70-72页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第72页 |
