| 中文摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 符号说明 | 第10-11页 |
| 文献综述 | 第11-29页 |
| 一、牛病毒性腹泻病毒的研究进展 | 第11-16页 |
| 1、牛病毒性腹泻病毒生物学特性及分类 | 第11-12页 |
| 2、牛病毒性腹泻病毒的致病性 | 第12页 |
| 3、牛病毒性腹泻病毒的流行现状 | 第12-13页 |
| 4、猪源BVDV感染对猪的影响 | 第13页 |
| 5、猪群中BVDV的鉴定 | 第13-14页 |
| 6、猪源BVDV在国内的流行传播 | 第14-15页 |
| 7、牛病毒性腹泻病毒的防控 | 第15-16页 |
| 二、干扰素刺激因子ISG15 | 第16-20页 |
| 1、ISG15蛋白结构 | 第16页 |
| 2、ISG15的类泛素化修饰系统 | 第16-17页 |
| 3、ISG15与病毒相互作用 | 第17-20页 |
| 参考文献 | 第20-29页 |
| 第一章 ISG15的原核表达及多抗血清的制备 | 第29-44页 |
| 摘要 | 第29页 |
| Abstract | 第29-30页 |
| 1. 材料 | 第30-31页 |
| 1.1 细胞、菌株和载体 | 第30页 |
| 1.2 主要试剂 | 第30-31页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第31页 |
| 1.4 实验动物 | 第31页 |
| 2. 方法 | 第31-36页 |
| 2.1 引物设计 | 第31页 |
| 2.2 氯化钙法制备DH5α感受态细胞 | 第31-32页 |
| 2.3 碱裂解法小提质粒 | 第32页 |
| 2.4 干扰素刺激因子ISG15的克隆 | 第32-34页 |
| 2.5 重组原核表达质粒的构建与鉴定 | 第34页 |
| 2.6 ISG15在pCold-TF载体中的原核表达 | 第34页 |
| 2.7 ISG15重组蛋白的纯化及浓度测定 | 第34-35页 |
| 2.8 ISG15重组蛋白多抗血清的制备与鉴定 | 第35-36页 |
| 3. 结果 | 第36-40页 |
| 3.1 ISG15基因的PCR产物 | 第36-37页 |
| 3.2 重组T载体质粒的鉴定 | 第37页 |
| 3.3 原核表达重组质粒的鉴定 | 第37-38页 |
| 3.4 ISG15重组蛋白的表达与鉴定 | 第38-40页 |
| 3.5 ISG15多克隆抗体的鉴定 | 第40页 |
| 4. 讨论 | 第40-42页 |
| 参考文献 | 第42-44页 |
| 第二章 稳定表达ISG15蛋白的细胞系的构建与鉴定 | 第44-56页 |
| 摘要 | 第44页 |
| Abstract | 第44-45页 |
| 1. 材料 | 第45-46页 |
| 1.1 质粒、病毒和细胞 | 第45页 |
| 1.2 主要试剂 | 第45-46页 |
| 1.3 主要仪器 | 第46页 |
| 2. 方法 | 第46-49页 |
| 2.1 引物设计 | 第46页 |
| 2.2 ISG15基因的PCR扩增及克隆 | 第46页 |
| 2.3 ISG15重组真核表达质粒的构建与鉴定 | 第46页 |
| 2.4 重组真核表达质粒的提纯 | 第46-47页 |
| 2.5 稳定表达ISG15蛋白细胞系的构建与筛选 | 第47-48页 |
| 2.6 稳定表达ISG15蛋白细胞系的鉴定 | 第48-49页 |
| 3. 结果 | 第49-52页 |
| 3.1 ISG15基因的PCR扩增产物 | 第49页 |
| 3.2 重组质粒pEASY-ISG15’的鉴定 | 第49-50页 |
| 3.3 重组真核表达质粒的鉴定 | 第50-51页 |
| 3.4 稳定表达ISG15蛋白细胞系的鉴定 | 第51-52页 |
| 4. 讨论 | 第52-54页 |
| 参考文献 | 第54-56页 |
| 第三章 ISG15和猪源BVDV-2相互作用探究 | 第56-66页 |
| 摘要 | 第56页 |
| Abstract | 第56-57页 |
| 1. 材料 | 第57-58页 |
| 1.1 病毒和细胞 | 第57-58页 |
| 1.2 主要试剂 | 第58页 |
| 1.3 主要仪器 | 第58页 |
| 2. 方法 | 第58-60页 |
| 2.1 引物设计 | 第58页 |
| 2.2 病毒的增殖与培养 | 第58-59页 |
| 2.3 病毒效价TCID50的测定 | 第59页 |
| 2.4 病毒滴度增长曲线的绘制 | 第59页 |
| 2.5 荧光定量PCR | 第59-60页 |
| 3. 结果 | 第60-62页 |
| 3.1 ISG15蛋白对猪源BVDV-2复制的影响 | 第60页 |
| 3.2 猪源BVDV-2感染对ISG15基因表达的影响 | 第60-61页 |
| 3.3 ISG15蛋白对猪源BVDV-2诱导Ⅰ型干扰素表达的影响 | 第61-62页 |
| 4. 讨论 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-66页 |
| 全文小结 | 第66-67页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第67页 |
| 以主要作者参编的著作 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
