| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 目录 | 第8-10页 |
| 第一章 前言 | 第10-16页 |
| 1.1 内质网应激(ER)与未折叠蛋白反应(UPR) | 第10-11页 |
| 1.1.1 内质网应激 | 第10页 |
| 1.1.2 未折叠蛋白反应 | 第10-11页 |
| 1.2 葡萄糖调节蛋白(GRPs) | 第11-12页 |
| 1.3 GRPs 在应激反应中的作用 | 第12-13页 |
| 1.4 葡萄糖调节蛋白基因启动子和转录激活因子 4(ATF4) | 第13-14页 |
| 1.4.1 葡萄糖调节蛋白基因启动子 | 第13页 |
| 1.4.2 转录激活因子 4(ATF4) | 第13-14页 |
| 1.5 本研究的意义与设计思路 | 第14-16页 |
| 第二章 材料和方法 | 第16-34页 |
| 2.1 仪器与试剂 | 第16-20页 |
| 2.1.1 主要仪器设备 | 第16-17页 |
| 2.1.2 主要试剂与试剂盒 | 第17-18页 |
| 2.1.3 载体、菌种与细胞株 | 第18页 |
| 2.1.4 引物表 | 第18-20页 |
| 2.2 实验材料 | 第20页 |
| 2.3 相关软件 | 第20页 |
| 2.4 实验方法 | 第20-34页 |
| 2.4.1 草鱼 ATF4、GRP78 和 GRP94 表达特性分析 | 第20-25页 |
| 2.4.2 草鱼 ATF4 与 GRP78、GRP94 的亲和性分析 | 第25-29页 |
| 2.4.3 草鱼 ATF4 激活 GRP78 启动子活性分析 | 第29-31页 |
| 2.4.4 草鱼 GRP78 和 GRP94 多抗血清的制备及其性能鉴定 | 第31-34页 |
| 第三章 结果与分析 | 第34-47页 |
| 3.1 草鱼 ATF4、GRP78 和 GRP94 表达特性分析 | 第34-37页 |
| 3.1.1 草鱼 ATF4 同源克隆 | 第34页 |
| 3.1.2 热激 RNA 提取 | 第34-35页 |
| 3.1.3 反转录合成 cDNA 第一链 | 第35页 |
| 3.1.4 荧光定量 PCR 检测草鱼 ATF4，GRP78 和 GRP94 基因 RNA 表达水平 | 第35-37页 |
| 3.2 草鱼 ATF4 与 GRP78、GRP94 的亲和性分析 | 第37-41页 |
| 3.2.1 ATF4 原核表达载体的构建、表达及纯化 | 第37页 |
| 3.2.2 CiATF4 蛋白突变 | 第37-38页 |
| 3.2.3 草鱼 GRP78 启动子克隆及其序列分析 | 第38-40页 |
| 3.2.4 草鱼 ATF4 与 CiGRP78 及 CiGRP94 启动子序列的亲和性分析 | 第40-41页 |
| 3.3 草鱼 ATF4 激活 GRP78 启动子活性分析 | 第41-44页 |
| 3.3.1 CiGRP78 启动子突变和 CiGRPs 启动子荧光报告载体的构建 | 第41-42页 |
| 3.3.2 细胞共转染 | 第42-44页 |
| 3.4 草鱼 GRP78 和 GRP94 多抗血清的制备及其性能鉴定 | 第44-47页 |
| 3.4.1 CiGRP78 和 CiGRP94 原核表达载体的构建、表达及纯化 | 第44页 |
| 3.4.2 CiGRP78 和 CiGRP94 蛋白浓度的测定 | 第44-45页 |
| 3.4.3 WB 测定 CiGRP78 和 CiGRP94 多抗血清的特异性 | 第45-47页 |
| 第四章 讨论 | 第47-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-60页 |
| 附录：攻读学位期间发表论文 | 第60页 |
