| 摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-16页 |
| 1 引言 | 第16-45页 |
| ·植物基因启动子的结构特点 | 第16-19页 |
| ·转录起始位点(Transcription start site) | 第17页 |
| ·TATA 盒(TATA-box) | 第17-18页 |
| ·CAAT 盒(CAAT-box) | 第18页 |
| ·GC-box 保守序列(GC-box conserved sequence) | 第18-19页 |
| ·植物基因启动子的类型 | 第19-36页 |
| ·组成型启动子(constitutive promoter) | 第20-23页 |
| ·CaMV 35S 启动子 | 第21-22页 |
| ·Nos 和Ocs 启动子 | 第22-23页 |
| ·ActⅠ启动子 | 第23页 |
| ·诱导型启动子(Inducible promoter) | 第23-26页 |
| ·光诱导启动子 | 第23-24页 |
| ·创伤诱导启动子 | 第24-25页 |
| ·化学物质诱导启动子(Chemical inducible promoter) | 第25-26页 |
| ·温度诱导启动子(Temperature inducible promoter) | 第26页 |
| ·组织或器官特异性启动子(tissue- or organ-specific promoter) | 第26-36页 |
| ·块茎专一性表达启动子(tuber-specific promoter) | 第28页 |
| ·维管束特异性表达启动子(vascular-specific promoter) | 第28-29页 |
| ·叶片特异性表达启动子(leaf-specific promoter) | 第29-30页 |
| ·花 药 ( 花 粉 ) 特 异 性 表 达 启 动 子 (anther- or pollen- specific promoter) | 第30-31页 |
| ·果实特异性表达启动子(fruit–specific promoter) | 第31-32页 |
| ·种子特异性启动子(seed-specific promoter) | 第32-35页 |
| ·胚特异性启动子(embryo-specific promoter) | 第35页 |
| ·胚乳组织特异性启动子(endosperm-specific promoter) | 第35-36页 |
| ·启动子在植物基因工程中的应用 | 第36-41页 |
| ·组成型启动子的应用 | 第36-37页 |
| ·诱导型启动子的应用 | 第37页 |
| ·组织特异启动子的应用 | 第37-41页 |
| ·抗虫基因工程 | 第37-38页 |
| ·抗病基因工程 | 第38-39页 |
| ·抗除草剂基因工程 | 第39页 |
| ·花卉改良基因工程 | 第39-40页 |
| ·果品储藏基因工程 | 第40页 |
| ·种子品质基因工程及生物反应器 | 第40-41页 |
| ·启动子的研究方法 | 第41-44页 |
| ·顺式作用元件的研究方法 | 第41-42页 |
| ·5′端缺失法 (5′-flanking region deletion) | 第41-42页 |
| ·内部缺失突变法 (internal deletion mutagenesis) | 第42页 |
| ·衔接物扫描突变法 (linker-scanning mutagenesis) | 第42页 |
| ·定点突变法 (site-directed mutagenesis) | 第42页 |
| ·DNA 与蛋白质互作的研究方法 | 第42-44页 |
| ·凝胶阻滞分析法 (gel retarding analysis) | 第42页 |
| ·足迹法(foot printing) | 第42-44页 |
| ·本课题的研究目的与意义 | 第44-45页 |
| 2 材料与方法 | 第45-65页 |
| ·材料 | 第45-48页 |
| ·植物材料 | 第45页 |
| ·植物材料培养与处理 | 第45页 |
| ·载体和菌株 | 第45-46页 |
| ·工具酶及生化试剂 | 第46-47页 |
| ·主要仪器设备 | 第47页 |
| ·实验所用引物 | 第47-48页 |
| ·实验方法 | 第48-65页 |
| ·植物基因组DNA 的提取 | 第48-49页 |
| ·质粒DNA 的提取 | 第49-51页 |
| ·PCR 扩增 | 第51页 |
| ·凝胶电泳中DNA 片段的回收 | 第51-53页 |
| ·DNA 琼脂糖凝胶电泳 | 第51-52页 |
| ·DNA 片段的回收 | 第52-53页 |
| ·DNA 片段与克隆载体的连接 | 第53-54页 |
| ·大肠杆菌DH5α感受态的制备及转化 | 第54-56页 |
| ·重组质粒的细菌菌落鉴定 | 第56-57页 |
| ·蓝白斑筛选 | 第56页 |
| ·菌落PCR 鉴定 | 第56页 |
| ·质粒DNA 的酶切鉴定 | 第56-57页 |
| ·克隆片段的序列测定 | 第57页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第57-59页 |
| ·启动子5′端缺失 | 第57页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第57-59页 |
| ·表达载体转化农杆菌 | 第59-60页 |
| ·农杆菌感受态制备 | 第59页 |
| ·表达载体转化农杆菌 | 第59-60页 |
| ·拟南芥的遗传转化及转基因植株的鉴定 | 第60-61页 |
| ·农杆菌的培养 | 第60页 |
| ·拟南芥转化 | 第60-61页 |
| ·转基因拟南芥植株的鉴定 | 第61页 |
| ·转基因拟南芥植株的GUS 活性组织化学染色 | 第61页 |
| ·转基因拟南芥的GUS 活性荧光定量检测 | 第61-63页 |
| ·GUS 荧光检测分析 | 第61-62页 |
| ·GUS 提取 | 第62页 |
| ·GUS 提取液蛋白含量测定 | 第62页 |
| ·酶反应 | 第62-63页 |
| ·荧光测定 | 第63页 |
| ·酶活力计算 | 第63页 |
| ·网络资源及数据库 | 第63-65页 |
| 3 结果与分析 | 第65-85页 |
| ·emb5 启动子的结构元件分析 | 第65-68页 |
| ·emb5 全长启动子的克隆 | 第65-66页 |
| ·emb5 启动子的结构元件分析 | 第66-68页 |
| ·emb5 启动子在拟南芥中具较高的胚特异活性 | 第68-73页 |
| ·pEm::GUS 植物表达载体的构建 | 第69页 |
| ·pEm::GUS 转基因拟南芥植株的获得 | 第69-70页 |
| ·emb5 启动子在拟南芥中胚特异活性分析 | 第70-73页 |
| ·emb5 启动子在转基因拟南芥中的5′端缺失分析 | 第73-81页 |
| ·5′端缺失片段表达载体的构建 | 第73-75页 |
| ·5′端缺失片段转基因拟南芥植株的获得 | 第75-76页 |
| ·emb5 启动子胚特异活性相关区域的定位 | 第76-77页 |
| ·5′缺失片段在种子萌发期及幼苗期的功能鉴定 | 第77-79页 |
| ·pD 片段具有全长emb5 启动子相同的胚特异活性 | 第79-80页 |
| ·emb5 启动子存在2 个正调控区域 | 第80-81页 |
| ·emb5 启动子存在1 个负调控区域 | 第81页 |
| ·emb5 启动子的胚特异顺式作用元件分析 | 第81-85页 |
| ·emb5 启动子包含7 个7-bp 的保守元件 | 第81-82页 |
| ·重复元件的功能分析 | 第82-85页 |
| ·GOF 植物表达载体的构建 | 第82-84页 |
| ·转基因拟南芥T1 代植株的获得 | 第84-85页 |
| 4 讨论 | 第85-90页 |
| ·emb5 启动子在拟南芥中具有较高的胚特异活性 | 第85-86页 |
| ·emb5 启动子的环境响应元件分析 | 第86页 |
| ·emb5 启动子的活性调控结构模式 | 第86-87页 |
| ·emb5 启动子胚特异表达顺式作用元件分析 | 第87-88页 |
| ·pD 片段是一个具有潜在应用价值的胚特异性启动子 | 第88-90页 |
| 5 结论 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-100页 |
| 附录 | 第100-106页 |
| 致谢 | 第106页 |
