| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 英文缩略词 | 第7-9页 |
| 目录 | 第9-12页 |
| 第1章 绪论 | 第12-22页 |
| 1.1 流行性出血热 | 第12-16页 |
| 1.2 酵母双杂交 | 第16-17页 |
| 1.3 核糖体及核糖体蛋白 | 第17-19页 |
| 1.4 NF-κB 信号通路 | 第19-22页 |
| 第2章 酵母双杂交筛选出血热病毒蛋白 G2 的人相互作用蛋白质 | 第22-46页 |
| 2.1 仪器、材料与方法 | 第22-25页 |
| 2.1.1 仪器设备 | 第22-23页 |
| 2.1.2 溶液配制 | 第23-24页 |
| 2.1.3 实验材料 | 第24-25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-28页 |
| 2.2.1 诱饵载体的构建 | 第25页 |
| 2.2.2 诱饵蛋白自激活活性检测 | 第25页 |
| 2.2.3 酵母细胞转化 | 第25-26页 |
| 2.2.4 正常成人脾脏 cDNA 文库质量控制及扩增 | 第26-27页 |
| 2.2.5 酵母细胞大规模高效转化 | 第27页 |
| 2.2.6 酵母双杂交文库筛选 | 第27页 |
| 2.2.7 猎物质粒的鉴定 | 第27-28页 |
| 2.2.8 回转验证 | 第28页 |
| 2.2.9 筛库数据分析 | 第28页 |
| 2.3 实验结果 | 第28-43页 |
| 2.3.1 诱饵载体的构建及诱饵蛋白自激活活性检测 | 第28-29页 |
| 2.3.2 文库质量控制及扩增 | 第29-30页 |
| 2.3.3 G2 蛋白脾文库筛选 | 第30页 |
| 2.3.4 阳性克隆测序分析 | 第30-31页 |
| 2.3.5 G2 候选相互作用分子的回转验证 | 第31-32页 |
| 2.3.6 G2 候选相互作用蛋白质基因功能(gene ontology，GO)分析 | 第32-36页 |
| 2.3.7 G2 与其他病原体相同的人相互作用蛋白质 | 第36-38页 |
| 2.3.8 G2 与其他病原体共同的人相互作用蛋白质的 GO 分析 | 第38-40页 |
| 2.3.9 G2 特有的人相互作用蛋白质的 GO 分析 | 第40-43页 |
| 2.4 讨论 | 第43-46页 |
| 第3章 G2 通过与 RPS3 相互作用影响 NF-κB 信号通路 | 第46-76页 |
| 3.1 仪器与材料 | 第46-48页 |
| 3.1.1 仪器设备 | 第46页 |
| 3.1.2 溶液配制 | 第46-48页 |
| 3.1.3 实验材料 | 第48页 |
| 3.2 实验方法 | 第48-52页 |
| 3.2.1 常用细胞培养条件 | 第48-49页 |
| 3.2.2 细胞总蛋白的提取 | 第49页 |
| 3.2.3 核质分离 | 第49页 |
| 3.2.4 Western Blot | 第49页 |
| 3.2.5 提取 RNA | 第49页 |
| 3.2.6 Realtime-PCR | 第49-50页 |
| 3.2.7 构建重组质粒 | 第50页 |
| 3.2.8 转染 | 第50页 |
| 3.2.9 报告基因实验 | 第50页 |
| 3.2.10 免疫共沉淀 | 第50页 |
| 3.2.11 GST-Pull Down | 第50-51页 |
| 3.2.12 间接免疫(荧光共聚焦) | 第51页 |
| 3.2.13 电转 | 第51-52页 |
| 3.2.14 凝胶迁移阻滞实验(Electrophoretic mobility shift assay, EMSA) | 第52页 |
| 3.2.15 统计学处理 | 第52页 |
| 3.3 实验结果 | 第52-73页 |
| 3.3.1 G1、G2、NP 真核表达载体构建 | 第52-53页 |
| 3.3.2 报告基因检测病毒蛋白对 NF-κB 转录活性的影响 | 第53-54页 |
| 3.3.3 Real-time PCR 检测 G1、G2 对 NF-κB 下游靶基因的影响 | 第54-55页 |
| 3.3.4 G2 与 RPS3 存在蛋白质相互作用 | 第55-57页 |
| 3.3.5 G2 与 RPS3 相互作用结构域的确定 | 第57-59页 |
| 3.3.7 免疫荧光实验观察 G2 与 RPS3 的定位 | 第59-60页 |
| 3.3.8 G2 以依赖于 RPS3 的方式上调 NF-κB 转录活性 | 第60-62页 |
| 3.3.9 Real-time PCR 检测 G2 对 RPS3 介导的 NF-κB 下游靶基因的影响 | 第62-64页 |
| 3.3.10 核糖体蛋白RPS3Ser209影响NF-κB转录活性及其与DNA结合能力 | 第64-67页 |
| 3.3.11 G2 与 RPS3S209A 存在相互作用 | 第67-68页 |
| 3.3.12 G2 对 RPS3 磷酸化的影响 | 第68-69页 |
| 3.3.13 免疫荧光实验检测 G2 对 RPS3 入核的影响 | 第69-70页 |
| 3.3.14 核质分离实验检测 G2 对 RPS3 入核的影响 | 第70-71页 |
| 3.3.15 G2 对 RPS3 与 NF-κB 结合能力的影响 | 第71-73页 |
| 3.3.16 G2 对 RPS3 与 IKKβ/Imp-α相互作用的影响 | 第73页 |
| 3.4 讨论 | 第73-76页 |
| 结论 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-84页 |
| 附录 | 第84-96页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第96-98页 |
| 致谢 | 第98页 |
