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出血热病毒与人蛋白质相互作用的初步研究

摘要第4-5页
Abstract第5-6页
英文缩略词第7-9页
目录第9-12页
第1章 绪论第12-22页
    1.1 流行性出血热第12-16页
    1.2 酵母双杂交第16-17页
    1.3 核糖体及核糖体蛋白第17-19页
    1.4 NF-κB 信号通路第19-22页
第2章 酵母双杂交筛选出血热病毒蛋白 G2 的人相互作用蛋白质第22-46页
    2.1 仪器、材料与方法第22-25页
        2.1.1 仪器设备第22-23页
        2.1.2 溶液配制第23-24页
        2.1.3 实验材料第24-25页
    2.2 实验方法第25-28页
        2.2.1 诱饵载体的构建第25页
        2.2.2 诱饵蛋白自激活活性检测第25页
        2.2.3 酵母细胞转化第25-26页
        2.2.4 正常成人脾脏 cDNA 文库质量控制及扩增第26-27页
        2.2.5 酵母细胞大规模高效转化第27页
        2.2.6 酵母双杂交文库筛选第27页
        2.2.7 猎物质粒的鉴定第27-28页
        2.2.8 回转验证第28页
        2.2.9 筛库数据分析第28页
    2.3 实验结果第28-43页
        2.3.1 诱饵载体的构建及诱饵蛋白自激活活性检测第28-29页
        2.3.2 文库质量控制及扩增第29-30页
        2.3.3 G2 蛋白脾文库筛选第30页
        2.3.4 阳性克隆测序分析第30-31页
        2.3.5 G2 候选相互作用分子的回转验证第31-32页
        2.3.6 G2 候选相互作用蛋白质基因功能(gene ontology,GO)分析第32-36页
        2.3.7 G2 与其他病原体相同的人相互作用蛋白质第36-38页
        2.3.8 G2 与其他病原体共同的人相互作用蛋白质的 GO 分析第38-40页
        2.3.9 G2 特有的人相互作用蛋白质的 GO 分析第40-43页
    2.4 讨论第43-46页
第3章 G2 通过与 RPS3 相互作用影响 NF-κB 信号通路第46-76页
    3.1 仪器与材料第46-48页
        3.1.1 仪器设备第46页
        3.1.2 溶液配制第46-48页
        3.1.3 实验材料第48页
    3.2 实验方法第48-52页
        3.2.1 常用细胞培养条件第48-49页
        3.2.2 细胞总蛋白的提取第49页
        3.2.3 核质分离第49页
        3.2.4 Western Blot第49页
        3.2.5 提取 RNA第49页
        3.2.6 Realtime-PCR第49-50页
        3.2.7 构建重组质粒第50页
        3.2.8 转染第50页
        3.2.9 报告基因实验第50页
        3.2.10 免疫共沉淀第50页
        3.2.11 GST-Pull Down第50-51页
        3.2.12 间接免疫(荧光共聚焦)第51页
        3.2.13 电转第51-52页
        3.2.14 凝胶迁移阻滞实验(Electrophoretic mobility shift assay, EMSA)第52页
        3.2.15 统计学处理第52页
    3.3 实验结果第52-73页
        3.3.1 G1、G2、NP 真核表达载体构建第52-53页
        3.3.2 报告基因检测病毒蛋白对 NF-κB 转录活性的影响第53-54页
        3.3.3 Real-time PCR 检测 G1、G2 对 NF-κB 下游靶基因的影响第54-55页
        3.3.4 G2 与 RPS3 存在蛋白质相互作用第55-57页
        3.3.5 G2 与 RPS3 相互作用结构域的确定第57-59页
        3.3.7 免疫荧光实验观察 G2 与 RPS3 的定位第59-60页
        3.3.8 G2 以依赖于 RPS3 的方式上调 NF-κB 转录活性第60-62页
        3.3.9 Real-time PCR 检测 G2 对 RPS3 介导的 NF-κB 下游靶基因的影响第62-64页
        3.3.10 核糖体蛋白RPS3Ser209影响NF-κB转录活性及其与DNA结合能力第64-67页
        3.3.11 G2 与 RPS3S209A 存在相互作用第67-68页
        3.3.12 G2 对 RPS3 磷酸化的影响第68-69页
        3.3.13 免疫荧光实验检测 G2 对 RPS3 入核的影响第69-70页
        3.3.14 核质分离实验检测 G2 对 RPS3 入核的影响第70-71页
        3.3.15 G2 对 RPS3 与 NF-κB 结合能力的影响第71-73页
        3.3.16 G2 对 RPS3 与 IKKβ/Imp-α相互作用的影响第73页
    3.4 讨论第73-76页
结论第76-78页
参考文献第78-84页
附录第84-96页
攻读硕士学位期间发表的学术论文第96-98页
致谢第98页

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