中文摘要 | 第3-5页 |
ABSTRACT | 第5-6页 |
第一章 前言 | 第9-18页 |
1.1 生长锥与神经元的发育 | 第9-11页 |
1.2. 微管与神经元突起生长 | 第11-13页 |
1.2.1 微管的结构特点 | 第11-12页 |
1.2.2 生长锥微管运动与突起生长 | 第12-13页 |
1.3. CRMPs 家族 | 第13-16页 |
1.3.1 CRMPs 的生物学特点 | 第13-14页 |
1.3.2 CRMPs 的空间表达特征 | 第14-15页 |
1.3.3 CRMPs 与神经元突起生长的关系 | 第15-16页 |
1.3.4 CRMPs 与疾病 | 第16页 |
1.4. 研究目的及其意义 | 第16-18页 |
第二章 实验材料和方法 | 第18-39页 |
2.1 实验材料 | 第18-23页 |
2.1.1 实验动物 | 第18页 |
2.1.2 细菌菌株、细胞株 | 第18页 |
2.1.3 主要试剂、工具和试剂盒 | 第18-20页 |
2.1.4 一般试剂的配制 | 第20-22页 |
2.1.5 主要的仪器设备 | 第22-23页 |
2.2 试验方法 | 第23-38页 |
2.2.1 RT-PCR | 第23-24页 |
2.2.2. 反转录反应 (RT) | 第24-25页 |
2.2.3. PCR 反应 | 第25-26页 |
2.2.4 构建 CRMP5-GST、CRMP5-FLAG 和 Tubulin-GFP 的重组原核、真核表达载 体 | 第26-28页 |
2.2.5 293T 细胞的培养 | 第28-30页 |
2.2.6 CRMP5-GST 融合蛋白与 Tubulin 的 Pulldown 分析及免疫印迹(Western Blot) 检测 | 第30-34页 |
2.2.7 CRMP5 与 tubulin 免疫荧光共定位 | 第34-35页 |
2.2.8 CRMP5 与 tubulin 免疫共沉淀(coIP)分析及检测 | 第35-37页 |
2.2.9 生长锥的提取 | 第37-38页 |
2.2.10 siRNA 的设计及合成 | 第38页 |
2.3 数据统计与分析 | 第38-39页 |
第三章 结果与分析 | 第39-49页 |
3.1 构建 Tubulin-GFP、CRMP5-FLAG 和 CRMP5-GST 的原核和真核重组表达载体 | 第39-40页 |
3.2 CRMP-5-GST 融合蛋白和 tubulin GST Pulldown 分析 | 第40-42页 |
3.2.1 CRMP-5-GST 融合蛋白的诱导表达,考马斯亮蓝染胶图 | 第40-41页 |
3.2.2 胎鼠脑组织生长锥的提取 | 第41页 |
3.2.3 CRMP5 和 Tubulin 的 Pulldown 分析 | 第41-42页 |
3.3 CRMP5 和 Tubulin 的 CoIP 分析 | 第42-43页 |
3.4 CRMP-5 和 Tubulin 免疫荧光共定位 | 第43-45页 |
3.4.1 CRMP-5 和 Tubulin 在 293T 细胞中免疫荧光共定位 | 第43-44页 |
3.4.2 CRMP5 和 Tubulin 在神经元及生长锥中免疫荧光共定位 | 第44-45页 |
3.5 干扰和过表达 CRMP5 对神经元生长锥发育的影响 | 第45-49页 |
3.5.1 干扰 CRMP-5 对神经元的生长发育的影响 | 第46-47页 |
3.5.2 过表达 CRMP-5 对神经元的生长发育的影响 | 第47-49页 |
第四章 讨论 | 第49-52页 |
第五章 结论 | 第52-53页 |
参考文献 | 第53-60页 |
附录:英文缩写词 | 第60-61页 |
在读期间发表论文 | 第61-62页 |
致谢 | 第62页 |