中文摘要 | 第4-6页 |
Abstract | 第6-7页 |
缩略词表 | 第11-13页 |
引言 | 第13-15页 |
一 材料与仪器 | 第15-18页 |
1 细胞株 | 第15页 |
2 实验使用的试剂及重要耗材 | 第15-17页 |
3 实验使用的仪器 | 第17-18页 |
二 所需溶液配制 | 第18-22页 |
1 药物溶液的配制 | 第18页 |
2 细胞培养中所需溶液的配制 | 第18-19页 |
2.1 含 10%和 20%胎牛血清的 RPMI-1640 培养基 | 第18页 |
2.2 PBS 缓冲液 | 第18页 |
2.3 0.04%台盼蓝 | 第18页 |
2.4 细胞冻存液 | 第18-19页 |
3 检测细胞粘附力、迁移力、侵袭力实验中所需溶液的配制 | 第19页 |
3.1 20μg·ml~(-1)的 FN 溶液 | 第19页 |
3.2 10 mg·ml~(-1)的 BSA 溶液 | 第19页 |
3.3 5 mg·ml~(-1)的 MTT 溶液 | 第19页 |
3.4 Matrigel 基质胶 | 第19页 |
3.5 0.1%的结晶紫溶液 | 第19页 |
4 RT-PCR 实验所需溶液的配制 | 第19-20页 |
4.1 0.1% DEPC 溶液 | 第19-20页 |
4.2 75%乙醇 | 第20页 |
4.3 5×TAE 电泳缓冲液(1L) | 第20页 |
4.4 5 mg·ml~(-1)的溴化乙啶(EB) | 第20页 |
4.5 1.5%琼脂糖 | 第20页 |
5 Western Blot 实验相关溶液的配制 | 第20-22页 |
5.1 电泳缓冲液 | 第20页 |
5.2 电转缓冲液 | 第20-21页 |
5.3 5×SDS loading buffer 缓冲液 | 第21页 |
5.4 10×TBS | 第21页 |
5.5 TBST 缓冲液(1×TBS+0.05%Tween-20) | 第21页 |
5.6 5%的脱脂奶粉封闭液 | 第21页 |
5.7 显影液 | 第21页 |
5.8 定影液 | 第21-22页 |
三 实验方法 | 第22-36页 |
1 细胞复苏、培养和冻存 | 第22-23页 |
1.1 细胞复苏 | 第22页 |
1.2 细胞培养 | 第22页 |
1.3 细胞传代 | 第22页 |
1.4 细胞冻存 | 第22-23页 |
1.5 细胞悬液制备及细胞计数 | 第23页 |
2 改良 MTT 法分别检测 FNC 对 Raji、JeKo-1 细胞粘附力的影响 | 第23-24页 |
3 Transwell 小室测定 FNC 对 Raji、JeKo-1 细胞迁移能力的影响 | 第24-25页 |
4 Transwell 小室测定 FNC 对 Raji、JeKo-1 细胞侵袭能力的影响 | 第25页 |
5 RT-PCR 法检测 FNC 对 Raji、JeKo-1 细胞中一些基因表达量的影响 | 第25-30页 |
5.1 试剂与器皿的准备 | 第26页 |
5.2 引物的序列与溶解 | 第26-27页 |
5.3 提取 Raji、JeKo-1 细胞的总 RNA | 第27页 |
5.4 RNA 样品的测定 | 第27-28页 |
5.5 cDNA 链的合成 | 第28-29页 |
5.6 PCR 产物凝胶电泳图像分析 | 第29-30页 |
6 Western Blot 法检测 FNC 对 Raji、JeKo-1 细胞中一些蛋白表达的影响18 | 第30-35页 |
6.1 提取 Raji 和 JeKo-1 细胞的总蛋白 | 第30-31页 |
6.2 BCA 法测定蛋白浓度 | 第31页 |
6.3 聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳 | 第31-33页 |
6.4 转膜 | 第33页 |
6.5 丽春红染膜 | 第33页 |
6.6 封闭 | 第33页 |
6.7 孵一抗 | 第33-34页 |
6.8 孵二抗 | 第34页 |
6.9 ECL 化学发光法显色 | 第34-35页 |
6.10 条带分析 | 第35页 |
7 数据分析 | 第35-36页 |
四 结果 | 第36-48页 |
1 FNC 对 Raji、JeKo-1 细胞粘附力的影响 | 第36-37页 |
2 FNC 对 Raji、JeKo-1 细胞迁移力、侵袭力的影响 | 第37-40页 |
3 FNC 对 Raji、JeKo-1 细胞中β-catenin、GSK-3β、MMP-2、MMP-9、E-cadherin 及 VEGF mRNA 表达的影响 | 第40-44页 |
4 FNC 对 Raji、JeKo-1 细胞中β-catenin、E-cadherin、GSK-3β、MMP-2、MMP-9 及 VEGF 蛋白表达的影响 | 第44-48页 |
五 讨论 | 第48-51页 |
六 结论 | 第51-52页 |
参考文献 | 第52-54页 |
综述 | 第54-68页 |
参考文献 | 第63-68页 |
个人简介 | 第68-69页 |
致谢 | 第69页 |