| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 目录 | 第11-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-21页 |
| 1.1 APC 蛋白及其 Armadillo 结构域 | 第14-18页 |
| 1.1.1 APC 蛋白的结构 | 第14-15页 |
| 1.1.2 APC 蛋白的功能 | 第15-17页 |
| 1.1.3 Armadillo 结构域的结构特点 | 第17-18页 |
| 1.2 Amer1 蛋白的结构与功能 | 第18-20页 |
| 1.2.1 Amer1 蛋白的结构 | 第18-19页 |
| 1.2.2 Amer1 蛋白的功能 | 第19-20页 |
| 1.3 本实验的研究内容和意义 | 第20-21页 |
| 第二章 材料与方法 | 第21-35页 |
| 2.1 主要仪器及设备 | 第21页 |
| 2.2 实验材料 | 第21-23页 |
| 2.2.1 大肠杆菌菌株 | 第21-22页 |
| 2.2.2 质粒载体 | 第22页 |
| 2.2.3 Amer111 肽 | 第22页 |
| 2.2.4 主要的酶及试剂 | 第22-23页 |
| 2.3 主要试剂的配制 | 第23-25页 |
| 2.3.1 培养基及常用溶液的配制 | 第23-25页 |
| 2.3.2 亲和层析、凝胶过滤的缓冲液 | 第25页 |
| 2.3.3 抗生素及其它试剂使用浓度 | 第25页 |
| 2.4 主要实验方法 | 第25-35页 |
| 2.4.1 引物的设计、合成及配制 | 第25-26页 |
| 2.4.2 PCR 扩增目的基因 | 第26-27页 |
| 2.4.3 目的基因的琼脂糖凝胶电泳及胶回收 | 第27页 |
| 2.4.4 目的基因回收片段及质粒的限制性内切酶切割 | 第27页 |
| 2.4.5 酶切片段与载体的连接 | 第27-28页 |
| 2.4.6 连接产物转化感受态细胞 | 第28页 |
| 2.4.7 质粒的小规模抽提 | 第28页 |
| 2.4.8 质粒测序及再次转化感受态细胞 | 第28页 |
| 2.4.9 目的蛋白的小规模表达检测 | 第28-29页 |
| 2.4.10 目的蛋白的大规模表达 | 第29页 |
| 2.4.11 凝胶过滤层析纯化蛋白 | 第29-30页 |
| 2.4.12 SDS-PAGE 分析法 | 第30-31页 |
| 2.4.13 Native-PAGE 分析法 | 第31页 |
| 2.4.14 蛋白质结晶初筛优化及冻存 | 第31-32页 |
| 2.4.15 晶体的 X-Ray 衍射及结构解析 | 第32-33页 |
| 2.4.16 GST-Pulldown 实验设计及分析 | 第33页 |
| 2.4.17 等温滴定量热（ITC）实验 | 第33-35页 |
| 第三章 蛋白 APC 与 Amer1365-375 片段复合物的晶体学研究 | 第35-46页 |
| 3.1 前言 | 第35-36页 |
| 3.2 实验结果 | 第36-44页 |
| 3.2.1 蛋白 APC407-775 与 Amer1365-375 的表达及纯化 | 第36-39页 |
| 3.2.2 APC 与 Amer1365-375 的 GST-Pulldown 实验 | 第39页 |
| 3.2.3 APC 与 Amer1365-375 的 ITC 实验 | 第39-40页 |
| 3.2.4 APC 与 Amer1365-375 的晶体筛选及结构解析 | 第40-44页 |
| 3.3 本章小结 | 第44-46页 |
| 第四章 蛋白 APC 与 Amer1 其他片段的结合研究 | 第46-53页 |
| 4.1 前言 | 第46-48页 |
| 4.2 实验结果 | 第48-51页 |
| 4.2.1 GST 标签融合蛋白 Amer1716-834、766-823、766-777、786-823、766-823Δ778-794 的表达及纯化 | 第48页 |
| 4.2.2 Amer1 蛋白片段与 APC 的 GST-Pulldown 结果 | 第48-50页 |
| 4.2.3 Amer1 蛋白片段与 APC 的 ITC 结果 | 第50-51页 |
| 4.3 本章小结 | 第51-53页 |
| 第五章 蛋白 APC 与 Amer1766-823Δ778-794 复合物纯化及晶体初筛 | 第53-60页 |
| 5.1 前言 | 第53页 |
| 5.2 实验结果 | 第53-58页 |
| 5.2.1 Ni 柱纯化蛋白 APC 与 Amer1766-823Δ778-794 复合物 | 第53-55页 |
| 5.2.2 Thrombin 酶切蛋白 APC-ARM 与 Amer1766-823Δ778-794 复合物 | 第55-56页 |
| 5.2.3 第二次过 Ni 柱去除 GST 标签 | 第56页 |
| 5.2.4 凝胶层析纯化去标签后的复合物 | 第56-57页 |
| 5.2.5 复合物的非变性胶鉴定 | 第57-58页 |
| 5.2.6 复合物的晶体初筛 | 第58页 |
| 5.3 本章小结 | 第58-60页 |
| 第六章 蛋白 APC 与 Amer1 融合蛋白的表达纯化及晶体初筛 | 第60-67页 |
| 6.1 前言 | 第60页 |
| 6.2 实验结果 | 第60-66页 |
| 6.2.1 融合蛋白 APC407-775 TEVAmer1740/766-823 的纯化 | 第60-63页 |
| 6.2.2 融合蛋白 APC407-775 TEV Amer1740/766-823 的 TEV 及 Trypsin酶切和纯化 | 第63-65页 |
| 6.2.3 融合蛋白酶切后非变性胶验证 | 第65页 |
| 6.2.4 融合蛋白的晶体初筛 | 第65-66页 |
| 6.3 本章小结 | 第66-67页 |
| 第七章 总结及讨论 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-73页 |
| 致谢 | 第73-75页 |
| 攻读硕士期间论文发表及专利申请情况 | 第75页 |
