| 摘要 | 第4-10页 |
| Abstract | 第10-17页 |
| 英文缩略语 | 第18-23页 |
| 第一部分：沉默PKC-α基因对TNF-α诱导GMCs内IP_3R1表达的影响 | 第23-48页 |
| 1 前言 | 第23-24页 |
| 2 材料和方法 | 第24-31页 |
| 2.1 材料 | 第24-26页 |
| 2.1.1 实验对象 | 第24页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第24页 |
| 2.1.3 主要试剂配制 | 第24-25页 |
| 2.1.4 主要实验器材 | 第25-26页 |
| 2.2 方法 | 第26-31页 |
| 2.2.1 实验分组 | 第26页 |
| 2.2.2 细胞培养、传代、siRNA-PKC-α转染及条带筛选 | 第26-27页 |
| 2.2.3 Real-TimePCR检测IP_3R1、PKC-αmRNA相对含量 | 第27-28页 |
| 2.2.4 WesternBlot检测IP_3R1、PKC-α、SP-1蛋白的相对含量 | 第28-29页 |
| 2.2.5 细胞内钙离子浓度的测定 | 第29-30页 |
| 2.2.6 ChIP | 第30-31页 |
| 2.2.7 统计学分析 | 第31页 |
| 3 结果 | 第31-43页 |
| 3.1 RealTimePCR分析siRNA敲减效率 | 第31-32页 |
| 3.2 WesternBlot分析siRNA敲减效率 | 第32-33页 |
| 3.3 RealTimePCR分析IP_3R1、PKC-αmRNA表达情况 | 第33-34页 |
| 3.4 WesternBlot分析IP_3R1、PKC-α蛋白表达情况 | 第34-35页 |
| 3.5 RealTimePCR分析敲减PKC-α对IP_3R1、PKC-αmRNA表达的影响.. | 第35-36页 |
| 3.6 Western Blot分析敲减PKC-α对IP_3R1、PKC-αmRNA表达的影响 | 第36-37页 |
| 3.7 细胞内钙离子浓度的测定 | 第37-38页 |
| 3.8 WesternBlot分析SP-1蛋白表达情况 | 第38页 |
| 3.9 ChIP实验检测SP-1与IP_3R1promoter的结合情况 | 第38-39页 |
| 3.10 WesternBlot分析敲减PKC-α对SP-1蛋白表达的影响 | 第39-40页 |
| 3.11 ChIP实验检测敲减PKC-α对SP-1与IP_3R1promoter结合的影响 | 第40页 |
| 3.12 WesternBlot分析TNF-α对JNK、p-JNK蛋白表达的影响 | 第40-41页 |
| 3.13 WesternBlot分析敲减PKC-α对JNK、p-JNK蛋白表达的影响 | 第41-43页 |
| 4 讨论 | 第43-46页 |
| 5 结论 | 第46-48页 |
| 第二部分：沉默PKC-α基因对肝肾综合征大鼠肾小球滤过率的影响 | 第48-69页 |
| 1 前言 | 第48-49页 |
| 2 材料和方法 | 第49-55页 |
| 2.1 材料 | 第49-50页 |
| 2.1.1 实验对象 | 第49页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第49页 |
| 2.1.3 主要试剂配制 | 第49-50页 |
| 2.1.4 主要实验器材 | 第50页 |
| 2.2 方法 | 第50-55页 |
| 2.2.1 动物体内敲减效率验证 | 第50-51页 |
| 2.2.2 Real-TimePCR检测IP_3R1、PKC-αmRNA相对含量 | 第51页 |
| 2.2.3 WesternBlot检测IP_3R1、PKC-α蛋白的相对含量 | 第51页 |
| 2.2.4 冰冻切片制作 | 第51页 |
| 2.2.5 构建HRS及LV-shRNA-PKC-α干预对模型 | 第51页 |
| 2.2.6 实验分组及处理 | 第51-52页 |
| 2.2.7 血清生物化学检查 | 第52页 |
| 2.2.8 肝肾组织病理学检查 | 第52页 |
| 2.2.9 FITC-Inulin溶液的准备 | 第52页 |
| 2.2.10 微渗透泵的准备 | 第52-53页 |
| 2.2.11 微渗透泵的植入 | 第53页 |
| 2.2.12 血清FITC-Inulin测定 | 第53页 |
| 2.2.13 计算GFR | 第53页 |
| 2.2.14 尿蛋白、微量白蛋白及尿NAG测定 | 第53-55页 |
| 2.2.15 统计学分析 | 第55页 |
| 3 结果 | 第55-65页 |
| 3.1 冰冻切片观察慢病毒感染效率 | 第55-57页 |
| 3.2 RealTimePCR分析慢病毒敲减效率 | 第57页 |
| 3.3 WesternBlot分析siRNA敲减效率 | 第57-58页 |
| 3.4 一般状况及生存率 | 第58页 |
| 3.5 血清生化学指标及细胞因子检测结果 | 第58-61页 |
| 3.6 肝脏及肾脏大体形态学改变 | 第61页 |
| 3.7 肝脏及肾脏组织学病理检查结果 | 第61-63页 |
| 3.8 各组大鼠GFR | 第63-64页 |
| 3.9 各组大鼠尿蛋白、尿微量白蛋白、尿NAG结果 | 第64-65页 |
| 4 讨论 | 第65-68页 |
| 5 结论 | 第68-69页 |
| 第三部分 ：沉默PKC-α基因对肝肾综合征大鼠肾脏IP_3R1表达的影响 | 第69-78页 |
| 1 前言 | 第69页 |
| 2 材料和方法 | 第69-72页 |
| 2.1 材料 | 第69-70页 |
| 2.1.1 实验对象 | 第69页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第69-70页 |
| 2.1.3 主要实验器材 | 第70页 |
| 2.2 方法 | 第70-72页 |
| 2.2.1 实验分组 | 第70-71页 |
| 2.2.2 Real-TimePCR检测IP_3R1、PKC-αmRNA相对含量 | 第71页 |
| 2.2.3 WesternBlot检测IP_3R1、PKC-α蛋白的相对含量 | 第71页 |
| 2.2.4 提取肾小球 | 第71页 |
| 2.2.5 肾小球毛细血管容量测量(GIS) | 第71页 |
| 2.2.6 肾小球内钙浓度测量 | 第71-72页 |
| 2.2.7 统计学分析 | 第72页 |
| 3 结果 | 第72-75页 |
| 3.1 Real-TimePCR检测IP_3R1、PKC-αmRNA相对含量 | 第72-73页 |
| 3.2 WesternBlot检测IP_3R1、PKC-α蛋白的相对含量 | 第73-74页 |
| 3.3 肾小球内钙浓度测量 | 第74页 |
| 3.4 肾小球毛细血管容量测量(GIS) | 第74-75页 |
| 4 讨论 | 第75-77页 |
| 5 结论 | 第77-78页 |
| 本研究创新点自我评价 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-86页 |
| 综述 | 第86-94页 |
| 参考文献 | 第91-94页 |
| 在学期期间研成绩 | 第94-95页 |
| 致谢 | 第95-96页 |
| 个人简介 | 第96页 |
