| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 第1章 文献综述 | 第11-19页 |
| 1.1 TCP基因的概述 | 第11页 |
| 1.2 植物分枝的概述 | 第11-16页 |
| 1.2.1 植物激素对腋芽的调控 | 第12-15页 |
| 1.2.2 CYC/TB1亚家族基因对腋芽的调控 | 第15页 |
| 1.2.3 种植密度对腋芽的调控 | 第15-16页 |
| 1.2.4 硼元素对腋芽发育的影响 | 第16页 |
| 1.3 酵母双杂交系统 | 第16-19页 |
| 1.3.1 酵母双杂交技术的基本原理 | 第16-17页 |
| 1.3.2 酵母双杂交系统的优点 | 第17页 |
| 1.3.3 酵母双杂交的缺点 | 第17-19页 |
| 第2章 引言 | 第19-21页 |
| 2.1 研究背景和意义 | 第19-20页 |
| 2.2 技术路线 | 第20-21页 |
| 第3章 矮牵牛TCP转录因子PhTCP3和PhTCP4的克隆 | 第21-29页 |
| 3.1 实验材料与试剂 | 第21-22页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第21页 |
| 3.1.2 菌株与载体 | 第21页 |
| 3.1.3 主要仪器设备 | 第21页 |
| 3.1.4 主要化学试剂及试剂盒 | 第21页 |
| 3.1.5 自配的主要试剂和常用培养基配方 | 第21-22页 |
| 3.2 实验方法 | 第22-26页 |
| 3.2.1 植物材料的种植 | 第22页 |
| 3.2.2 矮牵牛基因组DNA的提取 | 第22-23页 |
| 3.2.3 PCR引物设计及PCR扩增 | 第23页 |
| 3.2.4 BioSpin Gel Extraction kit 回收目的DNA片段 | 第23-24页 |
| 3.2.5 回收纯化产物与pMD19-T载体连接 | 第24页 |
| 3.7.6 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第24-25页 |
| 3.2.7 将连接产物转化到大肠杆菌感受态细胞中 | 第25页 |
| 3.2.8 转化子的鉴定 | 第25页 |
| 3.2.9 PhTCP3和PhTCP4基因的生物信息学分析 | 第25-26页 |
| 3.3 结果与分析 | 第26-27页 |
| 3.3.1 矮牵牛基因组DNA的检测 | 第26页 |
| 3.3.2 PhTCP3和PhTCP4基因的克隆 | 第26页 |
| 3.3.3 PhTCP3和PhTCP4基因Blastx分析 | 第26-27页 |
| 3.4 矮牵牛PHTCP3和PHTCP4的进化树分析 | 第27-28页 |
| 3.5 讨论 | 第28-29页 |
| 第4章 矮牵牛PhTCP3和PhTCP4转录的实时荧光定量分析 | 第29-37页 |
| 4.1 实验材料与试剂 | 第29页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第29页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第29页 |
| 4.1.3 主要仪器设备与耗材 | 第29页 |
| 4.2 实验方法 | 第29-32页 |
| 4.2.1 植物的取材 | 第29-30页 |
| 4.2.2 cDNA获得的方法 | 第30-31页 |
| 4.2.3 矮牵牛PhTCP3和PhTCP4表达的荧光定量分析 | 第31-32页 |
| 4.3 结果与分析 | 第32-35页 |
| 4.3.1 总RNA提取与质量控制 | 第32页 |
| 4.3.2 PhTCP3和PhTCP4基因表达特性分析 | 第32-35页 |
| 4.4 讨论 | 第35-37页 |
| 第5章 利用酵母双杂交法检测矮牵牛PhTCP2、PhTCP3和PhTCP4蛋白之间的相互作用 | 第37-51页 |
| 5.1 材料与方法 | 第37-41页 |
| 5.1.1 实验材料 | 第37-38页 |
| 5.1.2 引物设计及PCR扩增 | 第38页 |
| 5.1.3 总RNA的提取与cDNA合成 | 第38-39页 |
| 5.1.4 PhTCP2、PhTCP3和PhTCP4基因的PCR扩增及酵母表达载体的构建 | 第39页 |
| 5.1.5 酵母感受态制备 | 第39-40页 |
| 5.1.6 酵母感受态细胞的化学转化 | 第40页 |
| 5.1.7 重组质粒自激活和毒性检测 | 第40页 |
| 5.1.8 酵母融合与相互作用的检测 | 第40-41页 |
| 5.2 结果与分析 | 第41-49页 |
| 5.2.1 PhTCP2、PhTCP3和PhTCP4基因的克隆 | 第41-42页 |
| 5.2.2 酵母载体的双酶切验证 | 第42页 |
| 5.2.3 融合蛋白的毒性检测与自激活检测 | 第42-45页 |
| 5.2.4 PhTCP2、PhTCP3和PhTCP4蛋白之间相互作用的检测 | 第45-49页 |
| 5.3 讨论 | 第49-51页 |
| 第6章 矮牵牛PhTCP3和PhTCP4基因超量表达和CREST沉默研究 | 第51-69页 |
| 6.1 实验材料 | 第51-52页 |
| 6.1.1 植物材料 | 第51页 |
| 6.1.2 菌株与载体 | 第51页 |
| 6.1.3 主要仪器设备 | 第51页 |
| 6.1.4 试剂盒及主要试剂 | 第51页 |
| 6.1.5 常用试剂配制 | 第51-52页 |
| 6.1.6 矮牵牛转化基本培养基 | 第52页 |
| 6.2 实验方法 | 第52-56页 |
| 6.2.1 植物材料的处理 | 第52页 |
| 6.2.2 表达载体的构建 | 第52-54页 |
| 6.2.3 农杆菌电转化感受态的制备 | 第54页 |
| 6.2.4 电击杯的处理及农杆菌电转化感受态细胞的转化 | 第54-55页 |
| 6.2.5 农杆菌介导矮牵牛的转化 | 第55-56页 |
| 6.2.6 转基因植株的检测 | 第56页 |
| 6.3 结果与分析 | 第56-67页 |
| 6.3.1 PhTCP3和PhTCP4基因超量表达载体 | 第56-58页 |
| 6.3.2 PhTCP3和PhTCP4基因SRDX沉默表达载体的构建 | 第58-60页 |
| 6.3.3 转基因矮牵牛的获得和检测 | 第60-67页 |
| 6.4 讨论 | 第67-69页 |
| 第7章 总结 | 第69-71页 |
| 7.1 结论 | 第69页 |
| 7.1.1 矮牵牛PhTCP3和PhTCP4基因转录表达分析 | 第69页 |
| 7.1.2 矮牵牛PhTCP2、PhTCP3和PhTCP4蛋白之间的相互作用 | 第69页 |
| 7.1.3 矮牵牛PhTCP3、PhTCP4基因超量表达和CREST沉默 | 第69页 |
| 7.2 预测 | 第69-70页 |
| 7.3 下一步计划 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-79页 |
| 缩略词表 | 第79-81页 |
| 致谢 | 第81-83页 |
| 附录 | 第83页 |
