| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 第一章 miRNA的研究进展 | 第12-21页 |
| 1.1 miRNA的发现与生成 | 第12-13页 |
| 1.2 miRNA的特征 | 第13页 |
| 1.3 miRNA的作用机制 | 第13-16页 |
| 1.3.1 翻译抑制 | 第14-15页 |
| 1.3.2 mRNA降解 | 第15-16页 |
| 1.4 miRNA的功能 | 第16-19页 |
| 1.4.1 miRNA对生殖细胞的调控 | 第16页 |
| 1.4.2 miRNA对多能性干细胞的调控 | 第16-17页 |
| 1.4.3 miRNA对早期胚胎发育的调控 | 第17-18页 |
| 1.4.4 miRNA与癌症 | 第18-19页 |
| 1.5 精子miRNA研究 | 第19-21页 |
| 第二章 牛成熟精子中总RNA提取与miRNAs分离 | 第21-28页 |
| 2.1 材料与试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.1 试验材料与试剂耗材 | 第21页 |
| 2.1.2 主要实验仪器 | 第21-22页 |
| 2.2 试验方法 | 第22-25页 |
| 2.2.1 牛附睾精液收集 | 第22页 |
| 2.2.2 成熟精子获得 | 第22页 |
| 2.2.3 精子总RNA提取 | 第22页 |
| 2.2.4 精子miRNAs分离 | 第22-23页 |
| 2.2.5 精子特异miRNAs胶回收 | 第23-24页 |
| 2.2.6 精子miRNAs注射的成熟卵母细胞、成熟卵母细胞、合子收集 | 第24页 |
| 2.2.7 miRNA反转录与实时荧光定量 | 第24-25页 |
| 2.3 结果 | 第25-27页 |
| 2.3.1 精子总RNA浓度和纯度检测 | 第25页 |
| 2.3.2 精子miRNAs分离 | 第25-26页 |
| 2.3.3 精子miRNAs定量 | 第26-27页 |
| 2.4 讨论 | 第27页 |
| 2.5 小结 | 第27-28页 |
| 第三章 精子miRNAs影响牛核移植合子期胚胎胞质骨架蛋白α-tubulin乙酰化和组蛋白H3K9me3水平 | 第28-36页 |
| 3.1 材料与试剂 | 第28-29页 |
| 3.1.1 试验材料及主要试剂 | 第28-29页 |
| 3.1.2 主要仪器设备 | 第29页 |
| 3.2 实验方法 | 第29-31页 |
| 3.2.1 卵母细胞采集与体外成熟 | 第29页 |
| 3.2.2 供体细胞准备 | 第29页 |
| 3.2.3 体细胞核移植程序 | 第29-30页 |
| 3.2.4 重构胚融合、激活及培养 | 第30页 |
| 3.2.5 显微注射精子miRNAs到体细胞核移植胚胎 | 第30页 |
| 3.2.6 体外受精 | 第30页 |
| 3.2.7 免疫荧光染色 | 第30-31页 |
| 3.3 结果 | 第31-34页 |
| 3.3.1 精子miRNAs影响核移植合子期胚胎α-tubulin乙酰化水平 | 第31-32页 |
| 3.3.2 精子miRNAs对核移植胚胎原核及2-细胞时期H3K9me3水平调节 | 第32-34页 |
| 3.4 讨论 | 第34-35页 |
| 3.5 小结 | 第35-36页 |
| 第四章 精子miRNAs延长SCNT胚胎第一次卵裂时间促进早期胚胎发育 | 第36-41页 |
| 4.1 材料与试剂 | 第36页 |
| 4.1.1 试验材料及主要试剂 | 第36页 |
| 4.1.2 主要仪器设备 | 第36页 |
| 4.2 试验方法 | 第36-37页 |
| 4.2.1 体细胞核移植胚胎与体外受精胚胎获得 | 第36页 |
| 4.2.2 获得精子miRNAs克隆胚构建 | 第36页 |
| 4.2.3 双原核样结构染色 | 第36-37页 |
| 4.2.4 胚胎第一次卵裂时间监测 | 第37页 |
| 4.2.5 胚胎卵裂数、囊胚统计 | 第37页 |
| 4.2.6 囊胚凋亡染色 | 第37页 |
| 4.2.7 数据分析 | 第37页 |
| 4.3 结果 | 第37-39页 |
| 4.3.1 精子miRNAs促进重构胚两个原核样结构形成 | 第37-38页 |
| 4.3.2 精子miRNAs延长核移植胚胎第一次卵裂时间 | 第38页 |
| 4.3.3 精子miRNAs促进牛核移植胚胎早期发育 | 第38-39页 |
| 4.4 讨论 | 第39-40页 |
| 4.5 小结 | 第40-41页 |
| 全文总结 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-53页 |
| 附录 | 第53-56页 |
| 附录1 卵母细胞收集液配制 | 第53页 |
| 附录2 卵母细胞成熟液配制 | 第53-54页 |
| 附录3 胚胎培养液配制 | 第54页 |
| 附录4 精子获能液配制 | 第54-55页 |
| 附录5 PBS-PVA溶液配制 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 作者简介 | 第57页 |
