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蛋白激酶C delta和钙离子感受器STIM1在昆虫变态发育中的功能研究

摘要第7-9页
ABSTRACT第9-11页
符号说明第12-15页
第一章 前言第15-26页
    1 激素调控昆虫变态发育的概述第15-16页
    2 20E调控昆虫变态发育第16-22页
        2.1 20E的合成第16-17页
        2.2 20E的基因组途径第17-20页
            2.2.1 20E核受体EcR与超气门蛋白USP第18页
            2.2.2 HR3第18-19页
            2.2.3 变态起始因子Br第19页
            2.2.4 叉头框蛋白Forkhead boxO(FoxO)第19-20页
        2.3 20E的膜受体途径第20-22页
            2.3.1 GPCR参与20E信号途径第20-21页
            2.3.2 20E诱导蛋白质磷酸化第21页
            2.3.3 20E诱导Ca~(2+)浓度变化第21-22页
    3 20E诱导幼虫组织程序性细胞死亡(PCD)第22-25页
        3.1 20E与细胞凋亡第22-23页
        3.2 PKC与细胞凋亡第23-24页
        3.3 Ca~(2+)与细胞凋亡第24-25页
    4 存在的科学问题和研究方案第25-26页
第二章 PKCdelta参与棉铃虫蜕皮激素信号途径促进细胞凋亡的研究第26-55页
    1 引言第26-27页
    2 实验材料与方法第27-35页
        2.1 实验材料第27-28页
            2.1.1 实验动物第27页
            2.1.2 实验细胞第27页
            2.1.3 实验试剂第27-28页
            2.1.4 实验仪器第28页
        2.2 实验方法第28-35页
            2.2.1 组织RNA的提取第28页
            2.2.2 细胞系中RNA的提取第28-29页
            2.2.3 第一链cDNA的合成第29页
            2.2.4 组织蛋白的提取第29页
            2.2.5 细胞蛋白的提取第29页
            2.2.6 基因克隆第29页
            2.2.7 实时定量PCR第29-30页
            2.2.8 蛋白质免疫印记第30-31页
            2.2.9 过表达载体的构建第31页
            2.2.10 细胞系中蛋白过表达第31-32页
            2.2.11 虫体激素诱导第32页
            2.2.12 细胞激素诱导第32页
            2.2.13 λ-磷酸酶处理第32页
            2.2.14 HE染色第32-33页
            2.2.15 dsRNA的合成第33页
            2.2.16 虫体RNA干扰第33-34页
            2.2.17 细胞系RNA干扰第34页
            2.2.18 磷酸化水平检测第34页
            2.2.19 免疫共沉淀第34页
            2.2.20 染色质免疫共沉淀第34-35页
            2.2.21 细胞系中Caspase-3活性检测第35页
            2.2.22 翅盘的体外培养和测量第35页
            2.2.23 统计方法第35页
    3 实验结果第35-50页
        3.1 PKCδ的克隆及序列分析第35-38页
        3.2 20E在棉铃虫变态发育时期调控PKCδ高表达第38-41页
        3.3 幼虫中干扰PKCδ抑制了变态发育第41-44页
        3.4 过表达PKCδ催化结构域引起细胞凋亡第44-46页
        3.5 PKCδ磷酸化EcRB1第46-48页
        3.6 EcRB1的磷酸化决定了EcRB1/USP1异源二聚体的形成以及基因的转录表达第48-50页
    4 讨论第50-53页
        4.1 棉铃虫新型PKCδ的特征第51页
        4.2 20E通过上调PKCδ表达进而促进凋亡第51-52页
        4.3 PKCδ磷酸化EcRB1促使基因转录第52-53页
    5 小结第53-55页
第三章 内质网上Ca~(2+)感受器STIM1参与昆虫20E信号途径诱导Ca~(2+)内流促使细胞凋亡第55-82页
    1 引言第55-56页
    2 材料和方法第56-62页
        2.1 实验材料第56-57页
            2.1.1 实验动物第56页
            2.1.2 实验细胞第56-57页
            2.1.3 实验试剂第57页
            2.1.4 实验仪器第57页
        2.2 实验方法第57-62页
            2.2.1 组织和细胞中RNA的提取第57页
            2.2.2 第一链cDNA的合成第57页
            2.2.3 组织和细胞蛋白的提取第57页
            2.2.4 基因克隆第57页
            2.2.5 实时定量PCR第57页
            2.2.6 蛋白质免疫印记第57页
            2.2.7 细胞系中蛋白过表达第57-58页
            2.2.8 虫体激素诱导第58页
            2.2.9 λ-磷酸酶处理第58页
            2.2.10 HE染色第58页
            2.2.11 构建重组质粒第58页
            2.2.12 dsRNA的合成第58页
            2.2.113 虫体RNA干扰第58页
            2.2.14 细胞系RNA干扰第58页
            2.2.15 磷酸化水平检测第58页
            2.2.16 染色质免疫共沉淀第58页
            2.2.17 重组蛋白试表达第58-59页
            2.2.18 大规模表达重组蛋白第59页
            2.2.19 重组蛋白的纯化第59-60页
            2.2.20 制备多克隆抗体第60页
            2.2.21 细胞内Ca~(2+)水平检测第60-62页
    3 结果第62-78页
        3.1 STIM1的克隆及信息分析第62-64页
        3.2 STIM1的原核表达检测第64页
        3.3 棉铃虫STIM1在变态时期高量表达且以磷酸化形似存在第64-66页
        3.4 20E提高STIM1在中肠中的表达第66-67页
        3.5 20E通过膜受体以及核受体共同调控STIM1的表达第67-69页
        3.6 STIM1干扰后抑制了变态的发生和20E诱导的基因表达第69-71页
        3.7 STIM1在中肠和细胞中的定位第71-74页
        3.8 20E促使STIM1磷酸化第74-76页
        3.9 STIM1的磷酸化位点及效应第76-78页
    4 讨论第78-80页
        4.1 20E通过膜受体(ErGPCR-1和ErGPCR-2)和核转录复合体(EcRB1/USP1)上调STIM1的表达第78页
        4.2 20E通过一种新鉴定到的EcRE促进STIM1的转录第78-79页
        4.3 20E促进STIM1聚集并迁移到ER-PM连接处引发Ca~(2+)内流第79-80页
        4.4 PKC介导STIM1 Ser485的磷酸化促进STIM1的聚集和Ca~(2+)内流第80页
    5 小结第80-82页
论文创新点总结及意义第82-83页
参考文献第83-93页
致谢第93-94页
在读期间已发表的文章第94-95页
学位论文评阅及答辩情况表第95页

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