| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 符号说明 | 第12-15页 |
| 第一章 前言 | 第15-26页 |
| 1 激素调控昆虫变态发育的概述 | 第15-16页 |
| 2 20E调控昆虫变态发育 | 第16-22页 |
| 2.1 20E的合成 | 第16-17页 |
| 2.2 20E的基因组途径 | 第17-20页 |
| 2.2.1 20E核受体EcR与超气门蛋白USP | 第18页 |
| 2.2.2 HR3 | 第18-19页 |
| 2.2.3 变态起始因子Br | 第19页 |
| 2.2.4 叉头框蛋白Forkhead boxO(FoxO) | 第19-20页 |
| 2.3 20E的膜受体途径 | 第20-22页 |
| 2.3.1 GPCR参与20E信号途径 | 第20-21页 |
| 2.3.2 20E诱导蛋白质磷酸化 | 第21页 |
| 2.3.3 20E诱导Ca~(2+)浓度变化 | 第21-22页 |
| 3 20E诱导幼虫组织程序性细胞死亡(PCD) | 第22-25页 |
| 3.1 20E与细胞凋亡 | 第22-23页 |
| 3.2 PKC与细胞凋亡 | 第23-24页 |
| 3.3 Ca~(2+)与细胞凋亡 | 第24-25页 |
| 4 存在的科学问题和研究方案 | 第25-26页 |
| 第二章 PKCdelta参与棉铃虫蜕皮激素信号途径促进细胞凋亡的研究 | 第26-55页 |
| 1 引言 | 第26-27页 |
| 2 实验材料与方法 | 第27-35页 |
| 2.1 实验材料 | 第27-28页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第27页 |
| 2.1.2 实验细胞 | 第27页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第27-28页 |
| 2.1.4 实验仪器 | 第28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-35页 |
| 2.2.1 组织RNA的提取 | 第28页 |
| 2.2.2 细胞系中RNA的提取 | 第28-29页 |
| 2.2.3 第一链cDNA的合成 | 第29页 |
| 2.2.4 组织蛋白的提取 | 第29页 |
| 2.2.5 细胞蛋白的提取 | 第29页 |
| 2.2.6 基因克隆 | 第29页 |
| 2.2.7 实时定量PCR | 第29-30页 |
| 2.2.8 蛋白质免疫印记 | 第30-31页 |
| 2.2.9 过表达载体的构建 | 第31页 |
| 2.2.10 细胞系中蛋白过表达 | 第31-32页 |
| 2.2.11 虫体激素诱导 | 第32页 |
| 2.2.12 细胞激素诱导 | 第32页 |
| 2.2.13 λ-磷酸酶处理 | 第32页 |
| 2.2.14 HE染色 | 第32-33页 |
| 2.2.15 dsRNA的合成 | 第33页 |
| 2.2.16 虫体RNA干扰 | 第33-34页 |
| 2.2.17 细胞系RNA干扰 | 第34页 |
| 2.2.18 磷酸化水平检测 | 第34页 |
| 2.2.19 免疫共沉淀 | 第34页 |
| 2.2.20 染色质免疫共沉淀 | 第34-35页 |
| 2.2.21 细胞系中Caspase-3活性检测 | 第35页 |
| 2.2.22 翅盘的体外培养和测量 | 第35页 |
| 2.2.23 统计方法 | 第35页 |
| 3 实验结果 | 第35-50页 |
| 3.1 PKCδ的克隆及序列分析 | 第35-38页 |
| 3.2 20E在棉铃虫变态发育时期调控PKCδ高表达 | 第38-41页 |
| 3.3 幼虫中干扰PKCδ抑制了变态发育 | 第41-44页 |
| 3.4 过表达PKCδ催化结构域引起细胞凋亡 | 第44-46页 |
| 3.5 PKCδ磷酸化EcRB1 | 第46-48页 |
| 3.6 EcRB1的磷酸化决定了EcRB1/USP1异源二聚体的形成以及基因的转录表达 | 第48-50页 |
| 4 讨论 | 第50-53页 |
| 4.1 棉铃虫新型PKCδ的特征 | 第51页 |
| 4.2 20E通过上调PKCδ表达进而促进凋亡 | 第51-52页 |
| 4.3 PKCδ磷酸化EcRB1促使基因转录 | 第52-53页 |
| 5 小结 | 第53-55页 |
| 第三章 内质网上Ca~(2+)感受器STIM1参与昆虫20E信号途径诱导Ca~(2+)内流促使细胞凋亡 | 第55-82页 |
| 1 引言 | 第55-56页 |
| 2 材料和方法 | 第56-62页 |
| 2.1 实验材料 | 第56-57页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第56页 |
| 2.1.2 实验细胞 | 第56-57页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第57页 |
| 2.1.4 实验仪器 | 第57页 |
| 2.2 实验方法 | 第57-62页 |
| 2.2.1 组织和细胞中RNA的提取 | 第57页 |
| 2.2.2 第一链cDNA的合成 | 第57页 |
| 2.2.3 组织和细胞蛋白的提取 | 第57页 |
| 2.2.4 基因克隆 | 第57页 |
| 2.2.5 实时定量PCR | 第57页 |
| 2.2.6 蛋白质免疫印记 | 第57页 |
| 2.2.7 细胞系中蛋白过表达 | 第57-58页 |
| 2.2.8 虫体激素诱导 | 第58页 |
| 2.2.9 λ-磷酸酶处理 | 第58页 |
| 2.2.10 HE染色 | 第58页 |
| 2.2.11 构建重组质粒 | 第58页 |
| 2.2.12 dsRNA的合成 | 第58页 |
| 2.2.113 虫体RNA干扰 | 第58页 |
| 2.2.14 细胞系RNA干扰 | 第58页 |
| 2.2.15 磷酸化水平检测 | 第58页 |
| 2.2.16 染色质免疫共沉淀 | 第58页 |
| 2.2.17 重组蛋白试表达 | 第58-59页 |
| 2.2.18 大规模表达重组蛋白 | 第59页 |
| 2.2.19 重组蛋白的纯化 | 第59-60页 |
| 2.2.20 制备多克隆抗体 | 第60页 |
| 2.2.21 细胞内Ca~(2+)水平检测 | 第60-62页 |
| 3 结果 | 第62-78页 |
| 3.1 STIM1的克隆及信息分析 | 第62-64页 |
| 3.2 STIM1的原核表达检测 | 第64页 |
| 3.3 棉铃虫STIM1在变态时期高量表达且以磷酸化形似存在 | 第64-66页 |
| 3.4 20E提高STIM1在中肠中的表达 | 第66-67页 |
| 3.5 20E通过膜受体以及核受体共同调控STIM1的表达 | 第67-69页 |
| 3.6 STIM1干扰后抑制了变态的发生和20E诱导的基因表达 | 第69-71页 |
| 3.7 STIM1在中肠和细胞中的定位 | 第71-74页 |
| 3.8 20E促使STIM1磷酸化 | 第74-76页 |
| 3.9 STIM1的磷酸化位点及效应 | 第76-78页 |
| 4 讨论 | 第78-80页 |
| 4.1 20E通过膜受体(ErGPCR-1和ErGPCR-2)和核转录复合体(EcRB1/USP1)上调STIM1的表达 | 第78页 |
| 4.2 20E通过一种新鉴定到的EcRE促进STIM1的转录 | 第78-79页 |
| 4.3 20E促进STIM1聚集并迁移到ER-PM连接处引发Ca~(2+)内流 | 第79-80页 |
| 4.4 PKC介导STIM1 Ser485的磷酸化促进STIM1的聚集和Ca~(2+)内流 | 第80页 |
| 5 小结 | 第80-82页 |
| 论文创新点总结及意义 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-93页 |
| 致谢 | 第93-94页 |
| 在读期间已发表的文章 | 第94-95页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第95页 |
