| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第13-18页 |
| 1.1 转录因子概述 | 第13-15页 |
| 1.1.1 转录因子研究概况 | 第13-14页 |
| 1.1.2 锌指类转录因子研究现状 | 第14-15页 |
| 1.1.3 Zn2Cys6类转录因子概况 | 第15页 |
| 1.2 芸薹生链格孢菌的研究概述 | 第15-17页 |
| 1.2.1 芸薹生链格孢菌的危害 | 第15-16页 |
| 1.2.2 芸薹生链格孢转录因子研究现状 | 第16-17页 |
| 1.3 研究目的与意义 | 第17-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-38页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-23页 |
| 2.1.1 供试菌株 | 第18页 |
| 2.1.2 载体、酶和主要试剂(盒) | 第18-19页 |
| 2.1.3 实验仪器与设备 | 第19页 |
| 2.1.4 引物序列 | 第19-20页 |
| 2.1.5 所用培养基及溶剂配制 | 第20-23页 |
| 2.1.5.1 培养基配制 | 第20-22页 |
| 2.1.5.2 溶剂配制 | 第22-23页 |
| 2.1.6 主要软件工具及常用生物学分析网站 | 第23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-35页 |
| 2.2.1 本实验常用的分子生物学实验方法 | 第23-31页 |
| 2.2.1.1 基因组DNA的提取(试剂盒法) | 第23-24页 |
| 2.2.1.2 常规PCR扩增技术 | 第24页 |
| 2.2.1.3 电泳检测 | 第24-25页 |
| 2.2.1.4 产物的回收 | 第25-26页 |
| 2.2.1.5 基因序列分析 | 第26页 |
| 2.2.1.6 Split-markerPCR重组技术构建打靶片段 | 第26-27页 |
| 2.2.1.7 打靶载体的验证 | 第27页 |
| 2.2.1.8 质粒提取 | 第27-28页 |
| 2.2.1.9 质粒的浓缩 | 第28页 |
| 2.2.1.10 原生质体的制备与转化 | 第28-29页 |
| 2.2.1.11 总RNA的提取(Trizol法) | 第29-30页 |
| 2.2.1.12 反转录cDNA第一条链的合成 | 第30页 |
| 2.2.1.13 Southern杂交验证技术 | 第30-31页 |
| 2.2.2 Ab06986基因的生物信息学分析 | 第31页 |
| 2.2.3 芸薹生链格孢Ab06986基因的引物设计 | 第31页 |
| 2.2.4 芸薹生链格孢Ab06986基因打靶载体的构建 | 第31-32页 |
| 2.2.4.1 打靶片段的获得与验证 | 第31-32页 |
| 2.2.4.2 构建打靶片段 | 第32页 |
| 2.2.5 大肠杆菌感受态细胞转化 | 第32页 |
| 2.2.6 打靶载体的验证 | 第32-33页 |
| 2.2.7 质粒提取 | 第33页 |
| 2.2.8 PEG介导的原生质体转化 | 第33页 |
| 2.2.9 Ab06986基因缺失突变体的筛选及验证 | 第33-35页 |
| 2.2.9.1 突变体菌株的筛选 | 第33-34页 |
| 2.2.9.2 突变体菌株的DNA提取 | 第34页 |
| 2.2.9.3 突变体的PCR验证 | 第34页 |
| 2.2.9.4 突变体的RT-PCR验证 | 第34-35页 |
| 2.2.9.5 突变体的Southernblot验证 | 第35页 |
| 2.2.9.6 突变体的Ab06986基因互补体的构建 | 第35页 |
| 2.3 芸薹生链格孢Ab06986基因缺失突变体的功能研究 | 第35-38页 |
| 2.3.1 突变体的表型观察 | 第35-36页 |
| 2.3.2 突变体的菌落生长速度 | 第36页 |
| 2.3.3 突变体的显微形态观察 | 第36页 |
| 2.3.4 突变体的抗氧化能力测定 | 第36页 |
| 2.3.5 突变体的抗渗透胁迫能力测定 | 第36-37页 |
| 2.3.6 突变体的穿透力测定 | 第37页 |
| 2.3.7 突变体的致病性检测 | 第37-38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-57页 |
| 3.1 Ab06986基因的查找与分析 | 第38-41页 |
| 3.1.1 Ab06986基因的查找 | 第38-39页 |
| 3.1.2 Ab06986基因的克隆 | 第39页 |
| 3.1.3 Ab06986基因的保守区分析 | 第39-40页 |
| 3.1.4 Ab06986基因的相似性比对 | 第40-41页 |
| 3.2 Ab06986基因打靶载体的构建与验证 | 第41-43页 |
| 3.2.1 打靶载体片段的克隆 | 第41-42页 |
| 3.2.2 打靶载体的验证 | 第42-43页 |
| 3.3 Ab06986基因缺失突变体的筛选及验证 | 第43-47页 |
| 3.3.1 突变体的PCR验证 | 第43-44页 |
| 3.3.2 突变体的RT-PCR验证 | 第44-45页 |
| 3.3.3 突变体的southernblot验证 | 第45-46页 |
| 3.3.4 突变体的Ab06986基因互补体的验证 | 第46-47页 |
| 3.4 Ab06986基因缺失突变体生物学功能研究 | 第47-57页 |
| 3.4.1 突变体的菌落表型观察 | 第47-48页 |
| 3.4.2 突变体的菌落生长速度 | 第48-49页 |
| 3.4.3 Ab06986突变体的显微形态观察 | 第49-50页 |
| 3.4.4 Ab06986突变体的抗氧化能力检测 | 第50-51页 |
| 3.4.5 Ab06986突变体的抗渗透胁迫能力测定 | 第51-53页 |
| 3.4.6 Ab06986突变体的穿透力测定 | 第53-54页 |
| 3.4.7 突变体的致病性检测 | 第54-57页 |
| 4 讨论 | 第57-58页 |
| 5 结论 | 第58-59页 |
| 6 参考文献 | 第59-64页 |
| 7 致谢 | 第64-65页 |
| 8 攻读学位期间论文发表情况 | 第65页 |
