| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 1 前言 | 第8-25页 |
| 1.1 天然橡胶生物合成 | 第8-9页 |
| 1.2 14-3-3蛋白 | 第9-16页 |
| 1.2.1 14-3-3蛋白的亚细胞定位 | 第11页 |
| 1.2.2 14-3-3蛋白在植物中的作用 | 第11-16页 |
| 1.3 研究蛋白质间相互作用的技术 | 第16-24页 |
| 1.3.1 酵母双杂交技术的研究进展 | 第16-17页 |
| 1.3.2 酵母双杂交系统的组成及操作过程 | 第17-18页 |
| 1.3.3 酵母双杂交系统的优缺点 | 第18-19页 |
| 1.3.4 酵母双杂交技术的发展和衍生 | 第19-23页 |
| 1.3.5 酵母双杂交技术的应用 | 第23-24页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第24页 |
| 1.5 本研究总的技术路线 | 第24-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-40页 |
| 2.1 材料与试剂 | 第25-26页 |
| 2.1.1 材料 | 第25页 |
| 2.1.2 质粒及菌种 | 第25页 |
| 2.1.3 试剂 | 第25-26页 |
| 2.2 酵母双杂交诱饵载体的构建及诱饵载体的自激活与毒性检验 | 第26-29页 |
| 2.2.1 HbGF基因的扩增 | 第26页 |
| 2.2.2 PCR产物的回收 | 第26-27页 |
| 2.2.3 目的片断与pMD19-T连接及其重组子的筛选 | 第27-29页 |
| 2.3 14-3-3蛋白基因的诱饵载体的构建 | 第29-31页 |
| 2.3.1 加酶切位点的引物设计与合成 | 第29页 |
| 2.3.2 诱饵载体的构建与鉴定 | 第29-31页 |
| 2.4 酵母双杂交诱饵载体的检测 | 第31-34页 |
| 2.4.1 酵母菌株表型的鉴定 | 第31页 |
| 2.4.2 酵母双杂交阴阳性对照实验 | 第31-33页 |
| 2.4.3 诱饵载体的自激活检验 | 第33页 |
| 2.4.4 诱饵载体的毒性检验 | 第33-34页 |
| 2.4.5 3-AT抑制浓度的筛选 | 第34页 |
| 2.5 酵母双杂交文库的构建 | 第34-36页 |
| 2.5.1 链cDNA的纯化 | 第34页 |
| 2.5.2 文库的构建 | 第34-36页 |
| 2.6 诱饵载体与表达文库的杂交及阳性克隆的筛选 | 第36-40页 |
| 2.6.1 诱饵载体与表达文库的杂交 | 第36-37页 |
| 2.6.2 文库滴度检验 | 第37页 |
| 2.6.3 文库杂交镜检 | 第37页 |
| 2.6.4 杂交率的计算 | 第37页 |
| 2.6.5 阳性克隆的筛选及验证 | 第37-40页 |
| 3 结果与分析 | 第40-49页 |
| 3.1 诱饵蛋白基因的克隆和诱饵载体的构建与鉴定 | 第40页 |
| 3.2 诱饵载体的自激活检测 | 第40-42页 |
| 3.3 3-AT抑制浓度的筛选 | 第42页 |
| 3.4 诱饵载体的毒性检测 | 第42-43页 |
| 3.5 链cDNA的纯化 | 第43页 |
| 3.6 文库质量的鉴定 | 第43-44页 |
| 3.7 文库杂交镜检 | 第44-45页 |
| 3.8 杂交率的计算 | 第45-46页 |
| 3.9 阳性克隆的筛选 | 第46-47页 |
| 3.10 阳性克隆的共转化验证 | 第47-49页 |
| 4 讨论 | 第49-53页 |
| 4.1 阳性克隆的功能分析 | 第49-50页 |
| 4.2 14-3-3蛋白与天然橡胶生物合成 | 第50-51页 |
| 4.3 酵母双杂交的假阴性和假阳性问题 | 第51-53页 |
| 5 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-64页 |
| 附录 | 第64-68页 |
| 致谢 | 第68页 |