| 摘要 | 第8-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 缩略词表 | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第12-20页 |
| 1.1 研究背景 | 第12-13页 |
| 1.2 文献综述 | 第13-19页 |
| 1.2.1 miRNA的生物合成及其作用机制 | 第13-14页 |
| 1.2.1.1 miRNA的生物合成 | 第13页 |
| 1.2.1.2 miRNA的作用机制 | 第13-14页 |
| 1.2.2 miRNA靶基因的预测 | 第14-19页 |
| 1.2.2.1 生物信息学方法预测miRNA靶基因 | 第14-17页 |
| 1.2.2.2 生物实验方法预测miRNA靶基因 | 第17-19页 |
| 1.2.3 miRNA靶基因的鉴定 | 第19页 |
| 1.3 研究的目的和意义 | 第19-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-38页 |
| 2.1 材料 | 第20-26页 |
| 2.1.1 样品 | 第20页 |
| 2.1.2 细胞系和质粒 | 第20-21页 |
| 2.1.3 所用试剂和试剂盒 | 第21-24页 |
| 2.1.3.1 主要试剂和试剂盒 | 第21-22页 |
| 2.1.3.2 主要溶液的配制 | 第22-24页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第24-25页 |
| 2.1.5 生物信息学分析相关的软件和数据库 | 第25-26页 |
| 2.2 方法 | 第26-38页 |
| 2.2.1 总RNA的提取及质量检测 | 第26-27页 |
| 2.2.2 时间表达谱分析 | 第27-28页 |
| 2.2.2.1 相关引物的设计 | 第27页 |
| 2.2.2.2 cDNA第一链的合成 | 第27页 |
| 2.2.2.3 miRNA的扩增及检测 | 第27-28页 |
| 2.2.2.4 定量检测分析 | 第28页 |
| 2.2.3 空间表达谱分析 | 第28-32页 |
| 2.2.3.1 探针的合成以及纯化 | 第28-30页 |
| 2.2.3.2 斑点杂交检测探针标记效率和量 | 第30页 |
| 2.2.3.3 胚胎干粉的制备以及Fab片段的预吸附 | 第30-31页 |
| 2.2.3.4 WISH程序 | 第31-32页 |
| 2.2.4 靶基因ATRX 3’UTR双荧光素酶报告基因载体的构建 | 第32-35页 |
| 2.2.4.1 靶基因3’UTR的扩增 | 第32-33页 |
| 2.2.4.2 靶基因3’UTR与载体psiCHECK~(TM)-2的连接及测序 | 第33-35页 |
| 2.2.5 细胞培养及转染 | 第35-36页 |
| 2.2.5.1 鸡成纤维细胞系(UMNSAH/DF-1)的培养 | 第35页 |
| 2.2.5.2 细胞转染 | 第35-36页 |
| 2.2.6 双荧光素酶报告基因的检测 | 第36页 |
| 2.2.7 靶基因ATRX的时间表达谱分析 | 第36-38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-50页 |
| 3.1 RNA提取及质量检测结果 | 第38页 |
| 3.2 时间表达谱分析 | 第38-41页 |
| 3.3 空间表达模式分析 | 第41-43页 |
| 3.3.1 斑点杂交结果 | 第41页 |
| 3.3.2 gga-miR-92的表达 | 第41-43页 |
| 3.4 gga-miR-92靶基因预测及分析的结果 | 第43-46页 |
| 3.5 双荧光素酶报告基因载体的构建结果 | 第46-48页 |
| 3.5.1 ATRX 3’UTR序列的扩增 | 第46页 |
| 3.5.2 pUM-T-ATRX 3’UTR重组质粒的鉴定 | 第46-47页 |
| 3.5.3 psiCHECK~(TM)-2-ATRX 3’UTR重组质粒的鉴定 | 第47-48页 |
| 3.6 双荧光素酶报告基因的检测结果 | 第48-49页 |
| 3.7 ATRX时间表达谱结果 | 第49-50页 |
| 4 讨论 | 第50-54页 |
| 4.1 miRNA的表达谱分析 | 第50-51页 |
| 4.2 生物信息学预测鸡miRNA靶基因 | 第51-52页 |
| 4.3 靶基因的鉴定分析 | 第52-53页 |
| 4.4 miR-92与ATRX在鸡雄性性腺发育中的可能调控功能 | 第53-54页 |
| 5 小结 | 第54-55页 |
| 5.1 本研究所取得的结果 | 第54页 |
| 5.2 本研究的创新点和特色 | 第54页 |
| 5.3 下一步需要研究的问题 | 第54-55页 |
| 附录 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
