摘要 | 第7-9页 |
Abstract | 第9-11页 |
缩写名词表 | 第12-13页 |
1 前言 | 第13-30页 |
1.1 研究问题的由来 | 第13页 |
1.2 文献综述 | 第13-29页 |
1.2.1 植物非生物逆境胁迫信号传递的一般途径 | 第13-15页 |
1.2.2 ABA在植物非生物逆境信号传递中的作用 | 第15-20页 |
1.2.3 植物bZIP转录因子研究进展 | 第20-29页 |
1.3 研究的目的和意义 | 第29-30页 |
2 材料与方法 | 第30-42页 |
2.1 水稻材料 | 第30页 |
2.2 菌株和载体 | 第30-31页 |
2.3 候选基因的选择、序列分析、超表达载体构建和遗传转化 | 第31-32页 |
2.4 表达量检测 | 第32-33页 |
2.4.1 RNA抽提和反转录 | 第32-33页 |
2.4.2 实时定量(Real-time quantitative)PCR | 第33页 |
2.4.3 Northern杂交 | 第33页 |
2.4.4 蛋白抽提及Western blot | 第33页 |
2.5 突变体的基因型检测 | 第33-34页 |
2.6 用于候选基因表达谱分析的水稻材料准备 | 第34页 |
2.7 水稻材料的ABA敏感性和抗逆性鉴定 | 第34-36页 |
2.7.1 发芽期ABA敏感性鉴定 | 第34页 |
2.7.2 苗期ABA敏感性鉴定 | 第34-35页 |
2.7.3 苗期抗旱性鉴定 | 第35页 |
2.7.4 苗期抗高温和低温性鉴定 | 第35页 |
2.7.5 苗期抗盐性鉴定 | 第35页 |
2.7.6 苗期抗渗透胁迫性鉴定 | 第35-36页 |
2.7.7 成株期抗旱性鉴定 | 第36页 |
2.8 水稻离体叶片失水速率测定 | 第36页 |
2.9 激素含量测定 | 第36-37页 |
2.10 亚细胞定位 | 第37页 |
2.11 双分子荧光互补 | 第37页 |
2.12 定点诱变和缺失突变 | 第37-38页 |
2.13 酵母细胞中的生化实验 | 第38-40页 |
2.13.1 酵母中的反式激活检测 | 第38-39页 |
2.13.2 酵母双杂交-文库筛选 | 第39页 |
2.13.3 酵母双杂交-点对点验证 | 第39-40页 |
2.13.4 酵母单杂交 | 第40页 |
2.14 原核表达 | 第40页 |
2.15 蛋白磷酸化试验 | 第40页 |
2.16 基因芯片分析 | 第40-42页 |
3 结果与分析 | 第42-89页 |
3.1 bZIP候选基因的遗传转化和抗逆性筛选 | 第42-45页 |
3.1.1 转化载体构建和遗传转化 | 第42-43页 |
3.1.2 转基因材料的分子检测 | 第43-44页 |
3.1.3 转基因材料的表型初步筛选 | 第44-45页 |
3.2 OsbZIP46的功能鉴定 | 第45-64页 |
3.2.1 OsbZIP46的序列分析 | 第46页 |
3.2.2 OsbZIP46的表达模式分析 | 第46-48页 |
3.2.3 OsbZIP46的亚细胞定位 | 第48页 |
3.2.4 OsbZIP46超表达和突变体材料的分子检测 | 第48-49页 |
3.2.5 OsbZIP46超表达增强植株对ABA的敏感性 | 第49-51页 |
3.2.6 OsbZIP46超表达植株的抗旱性鉴定 | 第51-53页 |
3.2.7 OsbZIP46的转录激活活性的分析 | 第53-54页 |
3.2.8 OsbZIP46CA1超表达材料的表型鉴定 | 第54-58页 |
3.2.9 OsbZIP46和OsbZIP46CA1超表达具有不同的全基因组表达谱 | 第58-62页 |
3.2.10 OsbZIP46可能被磷酸化激活 | 第62-64页 |
3.3 ST14的功能鉴定 | 第64-73页 |
3.3.1 ST14的序列分析 | 第64-65页 |
3.3.2 ST14的表达模式分析 | 第65-66页 |
3.3.3 ST14的亚细胞定位和转录激活活性分析 | 第66-67页 |
3.3.4 ST14超表达增强植株的ABA敏感性和抗旱性 | 第67-71页 |
3.3.5 ST14调控下游抗逆相关基因的表达 | 第71-72页 |
3.3.6 ST14超表达影响ABA的分解代谢 | 第72-73页 |
3.4 OsbZIP23的互作蛋白BIP4(OsbZIP23 interaction protein 4) | 第73-89页 |
3.4.1 酵母双杂交筛选OsbZIP23互作蛋白 | 第73-74页 |
3.4.2 验证OsbZIP23和BIP4的互作 | 第74-77页 |
3.4.3 BIP4的表达受ABA和逆境胁迫调节 | 第77-78页 |
3.4.4 BIP4负调节ABA信号传导和逆境应答 | 第78-83页 |
3.4.5 BIP4负调节OsZIP23 | 第83-84页 |
3.4.6 BIP4介导泛素连接酶FIP1与OsbZIP23的结合 | 第84-89页 |
4 讨论 | 第89-98页 |
4.1 OsbZIP46转录活性的调节 | 第89-92页 |
4.1.1 组成型激活是研究OsbZIP46功能的重要方法 | 第89-90页 |
4.1.2 OsbZIP46转录活性可能的调节机制 | 第90-91页 |
4.1.3 超表达全长OsbZIP46对抗旱性的负效应 | 第91-92页 |
4.1.4 OsbZIP46可能存在的去磷酸化机制 | 第92页 |
4.2 OsbZIP23的降解 | 第92-94页 |
4.3 D结构域的普遍性意义 | 第94-95页 |
4.3.1 D结构域负调节转录活性 | 第94页 |
4.3.2 D结构域调节蛋白稳定性 | 第94页 |
4.3.3 D结构域可能起重要调节作用 | 第94-95页 |
4.4 ABF类成员OsbZIP23、OsbZIP46、ST14的联系和区别 | 第95-96页 |
4.5 利用转基因策略改良水稻抗逆性 | 第96-98页 |
参考文献 | 第98-115页 |
附录 | 第115-159页 |
附录Ⅰ. 附图 | 第115-119页 |
附录Ⅱ. 附表 | 第119-146页 |
附录Ⅲ. 部分实验的详细操作程序 | 第146-157页 |
附录Ⅳ. 作者简介 | 第157-159页 |
致谢 | 第159页 |