| 中文摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-26页 |
| ·猪乙型脑炎病毒相关简介 | 第11-16页 |
| ·乙型脑炎病毒 | 第11页 |
| ·JEV及其基因组的结构 | 第11-12页 |
| ·JEV的基因组特性 | 第12页 |
| ·乙型脑炎病毒E蛋白结构及特性 | 第12-13页 |
| ·E蛋白抗原表位的研究 | 第13-14页 |
| ·乙脑病毒核酸疫苗的相关研究 | 第14-16页 |
| ·猪细小病毒相关简介 | 第16-19页 |
| ·猪细小病毒 | 第16-17页 |
| ·PPV基因组及其产物 | 第17-18页 |
| ·VP2基因及其编码蛋白的功能 | 第18-19页 |
| ·VP2基因应用于核酸疫苗的相关研究 | 第19页 |
| ·有关白介素2的相关综述 | 第19-23页 |
| ·白细胞介素及其作为分子佐剂的应用 | 第20页 |
| ·猪白细胞介素2及其作为分子佐剂的研究进展 | 第20-22页 |
| ·IL-2在DNA疫苗免疫增强剂方面的应用 | 第22-23页 |
| ·重叠延伸PCR的相关简介 | 第23-25页 |
| ·重叠延伸PCR | 第23-24页 |
| ·重叠延伸PCR的应用 | 第24-25页 |
| ·实验目的、意义 | 第25页 |
| ·问题及展望 | 第25-26页 |
| 2 材料 | 第26-28页 |
| ·实验材料 | 第26-27页 |
| ·主要仪器 | 第27页 |
| ·主要溶液配制 | 第27-28页 |
| ·细胞培养用液 | 第27页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备及转化用溶液 | 第27-28页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳所用溶液 | 第28页 |
| ·抗凝血所用溶液 | 第28页 |
| 3 实验方法 | 第28-42页 |
| ·试验中PCR扩增所用引物的设计与合成 | 第28页 |
| ·JEV EⅢ′基因的获得 | 第28-31页 |
| ·质粒pMD-E的抽提 | 第28-29页 |
| ·JEV EⅢ′基因的PCR扩增 | 第29-30页 |
| ·目的DNA片段的回收 | 第30-31页 |
| ·PPV VP2基因的获得 | 第31-32页 |
| ·pPVP2质粒的抽提 | 第31页 |
| ·PPV VP2基因的PCR扩增 | 第31-32页 |
| ·目的DNA片段的回收 | 第32页 |
| ·重叠延伸PCR扩增EⅢ′-VP2基因 | 第32页 |
| ·基因EⅢ′-VP2的克隆 | 第32-34页 |
| ·目的DNA片段的回收 | 第32-33页 |
| ·大肠杆菌(DH5α)感受态细胞的制备 | 第33页 |
| ·连接与转化 | 第33页 |
| ·重组质粒的筛选及鉴定 | 第33-34页 |
| ·共表达真核载体pcDNA-EⅢ′.VP2(pcDNA-E.V)的构建 | 第34-35页 |
| ·真核表达载体pcDNA3.1(+)质粒DNA的获得 | 第34页 |
| ·pMD-E.V和pcDNA3.1的酶切回收 | 第34-35页 |
| ·连接与转化 | 第35页 |
| ·重组质粒pcDNA-E.V的筛选与鉴定 | 第35页 |
| ·IL-2基因的获得 | 第35-36页 |
| ·质粒pET32a-IL2的抽提 | 第35页 |
| ·IL-2基因的PCR扩增 | 第35-36页 |
| ·猪IL-2基因的克隆 | 第36-37页 |
| ·目的DNA片段的回收 | 第36页 |
| ·连接与转化 | 第36页 |
| ·重组质粒的筛选及鉴定 | 第36-37页 |
| ·pcDNA-IL2的构建 | 第37-38页 |
| ·pMD-IL-2和pcDNA3.1的酶切回收 | 第37页 |
| ·连接与转化 | 第37页 |
| ·重组质粒pcDNA-IL2的筛选与鉴定 | 第37-38页 |
| ·融合表达载体pcDNA-IL2-EⅢ′.VP2(pcDNA-2-E.V)的构建 | 第38页 |
| ·重组载体pcDNA-E.V酶切开环及回收 | 第38页 |
| ·连接与转化 | 第38页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第38页 |
| ·重组质粒pcDNA-E.V、pcDNA-2-E.V转染Vero细胞 | 第38-39页 |
| ·去内毒素的质粒DNA的抽提 | 第38-39页 |
| ·质粒DNA的转染 | 第39页 |
| ·RT-PCR法检测目的基因的转录情况 | 第39页 |
| ·间接免疫荧光试验(IFA)检测目的蛋白的体外表达 | 第39-40页 |
| ·重组质粒免疫原性的初步研究 | 第40-42页 |
| ·重组质粒的大量制备及纯化 | 第40-41页 |
| ·小鼠的分组及免疫接种 | 第41页 |
| ·ELISA检测小鼠血清中PPV/JEV抗体 | 第41-42页 |
| ·小鼠脾淋巴细胞增殖反应试验 | 第42页 |
| ·小鼠T淋巴细胞亚群检测 | 第42页 |
| 4 结果 | 第42-52页 |
| ·EⅢ′基因的PCR扩增 | 第42-43页 |
| ·VP2基因的PCR扩增 | 第43页 |
| ·EⅢ′-VP2基因的克隆 | 第43-44页 |
| ·基因EⅢ′-VP2的PCR扩增 | 第43-44页 |
| ·pMD-E.V质粒的酶切鉴定 | 第44页 |
| ·pMD-E.V质粒的测序鉴定 | 第44页 |
| ·真核表达质粒pcDNA-E.V的酶切鉴定 | 第44-45页 |
| ·猪IL-2基因的克隆 | 第45-46页 |
| ·猪IL-2基因的PCR扩增 | 第45页 |
| ·重组质粒PMD-IL-2的酶切鉴定 | 第45页 |
| ·PMD-IL-2质粒的测序鉴定 | 第45-46页 |
| ·重组质粒pcDNA-IL-2的鉴定 | 第46页 |
| ·重组质粒pcDNA-IL2-E.V的鉴定 | 第46-47页 |
| ·RT-PCR法检测重组质粒的转录情况 | 第47页 |
| ·重组质粒转染细胞后的免疫荧光检测 | 第47-48页 |
| ·疫苗诱导小鼠体液免疫应答效果的比较 | 第48-52页 |
| ·JEV抗体的检测 | 第48-49页 |
| ·PPV抗体的检测 | 第49-50页 |
| ·疫苗诱导的脾淋巴细胞增殖效果比较 | 第50-51页 |
| ·小鼠外周血T淋巴细胞亚群分析比较 | 第51-52页 |
| 5 讨论 | 第52-57页 |
| ·抗原表位的选择 | 第52-53页 |
| ·重叠PCR连接目的抗原基因 | 第53页 |
| ·真核表达载体的选择与构建 | 第53-54页 |
| ·佐剂 | 第54-55页 |
| ·转染与表达 | 第55页 |
| ·免疫原性讨论 | 第55-57页 |
| ·体液免疫 | 第55-56页 |
| ·细胞免疫 | 第56-57页 |
| 6 小结 | 第57-59页 |
| 参考文献 | 第59-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
