摘要 | 第5-7页 |
ABSTRACT | 第7-9页 |
目录 | 第10-13页 |
缩略词 | 第13-14页 |
第一部分 文献综述 | 第14-23页 |
1 稻瘟病与稻瘟病菌 | 第14-15页 |
1.1 稻瘟病与稻瘟病菌 | 第14页 |
1.2 稻瘟病菌致病相关基因 | 第14-15页 |
2 DExD/H-box基因家族 | 第15-22页 |
2.1 DExD/H-box基因家族的结构与分类 | 第16-17页 |
2.2 DExD/H-box基因家族的细胞学功能 | 第17-20页 |
2.3 DExD/H-box蛋白在动植物中的生物学功能 | 第20-21页 |
2.4 微生物中DExD/H-box蛋白的功能 | 第21-22页 |
3 本研究的目的与意义 | 第22-23页 |
第二部分 研究内容 | 第23-83页 |
第一章 稻瘟病菌DExD/H-box家族的生物信息学分析 | 第23-34页 |
1 材料方法 | 第23-25页 |
1.1 DExD/H-box家族序列的获得 | 第23-24页 |
1.2 多序列连配和系统进化树的构建 | 第24页 |
1.3 基因结构分析 | 第24页 |
1.4 基因表达分析 | 第24-25页 |
2 结果与分析 | 第25-33页 |
2.1 稻瘟病菌中DExD/H-box家族基因的筛选 | 第25页 |
2.2 多序列连配及系统进化分析 | 第25-27页 |
2.3 基因结构分析 | 第27-30页 |
2.4 基因表达分析 | 第30-33页 |
3 小结与讨论 | 第33-34页 |
第二章 稻瘟病菌MoDHX35基因的克隆与功能分析 | 第34-57页 |
1 材料与方法 | 第34-41页 |
1.1 基因的鉴定与克隆 | 第34页 |
1.2 常用实验材料及方法 | 第34-37页 |
1.3 Real-Time PCR | 第37页 |
1.4 载体构建 | 第37-38页 |
1.5 利用AtMT进行基因敲除与互补 | 第38页 |
1.6 转化子的筛选与验证 | 第38-39页 |
1.7 表型分析 | 第39-41页 |
2 结果与分析 | 第41-55页 |
2.1 MoDHX35的鉴定与克隆 | 第41-43页 |
2.2 MoDHX35的基因表达 | 第43-44页 |
2.3 MoDHX35的基因敲除与验证 | 第44-46页 |
2.4 MoDHX35突变体表型分析 | 第46-55页 |
3 小结与讨论 | 第55-57页 |
第三章 稻瘟病菌MoDHH1基因的克隆与功能分析 | 第57-83页 |
1 材料与方法 | 第57-63页 |
1.1 基因的鉴定与克隆 | 第57页 |
1.2 常用实验材料及方法 | 第57-58页 |
1.3 Real-Time PCR | 第58-59页 |
1.4 载体构建 | 第59-60页 |
1.5 利用AtMT进行MoDHH1敲除与互补 | 第60页 |
1.6 酵母互补 | 第60页 |
1.7 转化子的筛选与验证 | 第60-61页 |
1.8 表型分析 | 第61-63页 |
2 结果与分析 | 第63-81页 |
2.1 MoDHH1的鉴定与克隆 | 第63-65页 |
2.2 MoDHH1能够互补酵母ΔDHH1的药物抗性及生长缺陷 | 第65-67页 |
2.3 MoDHH1的基因表达及蛋白定位 | 第67-68页 |
2.4 MoDHH1的转化子筛选与验证 | 第68-71页 |
2.5 MoDHH1的表型分析 | 第71-81页 |
3 小结与讨论 | 第81-83页 |
参考文献 | 第83-89页 |
附录1 引物表 | 第89-96页 |
附录2 培养基配方 | 第96-102页 |
附录3 PCR扩增和DNA克隆体系 | 第102-104页 |
附录4 大肠杆菌转化实验 | 第104-106页 |
附录5 农杆菌感受态的制备与转化 | 第106-107页 |
附录6 CTAB法提取基因组DNA | 第107-108页 |
附录7 Southern杂交 | 第108-111页 |
附录8 Trizol法提取真菌总RNA及反转录 | 第111-113页 |
附录9 Real-Time PCR方法(SYBR Green嵌合荧光法) | 第113-115页 |
附录10 稻瘟病菌AtMT转化 | 第115-116页 |
附录11 酵母转化 | 第116-117页 |
附录12 稻瘟病菌中DExD/H-box家族基因及其同源信息 | 第117-121页 |
致谢 | 第121-122页 |
攻读学位期间获得研究成果 | 第122-123页 |