| 缩略词 | 第10-11页 |
| 中文摘要 | 第11-13页 |
| Abstract | 第13-15页 |
| 致谢 | 第16-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-35页 |
| 1.1 生物质资源及利用 | 第17-19页 |
| 1.1.1 生物质资源 | 第17页 |
| 1.1.2 纤维素及其降解 | 第17-18页 |
| 1.1.3 纤维素的降解 | 第18-19页 |
| 1.2 B-葡萄糖苷酶 | 第19-28页 |
| 1.2.1 β-葡萄糖昔酶的分类 | 第20页 |
| 1.2.2 β-葡萄糖苷酶的催化机制 | 第20-24页 |
| 1.2.3 β-葡萄糖苷酶的结构 | 第24-26页 |
| 1.2.4 β-葡萄糖苷酶的性质 | 第26-28页 |
| 1.3 B-葡萄糖苷酶的应用 | 第28-31页 |
| 1.3.1 β-葡萄糖苷酶在生物能源领域的应用 | 第28-29页 |
| 1.3.2 β-葡萄糖苷酶在食品保健领域的应用 | 第29-30页 |
| 1.3.3 β-葡萄糖苷酶在饲料领域的应用 | 第30-31页 |
| 1.4 酶分子改造 | 第31-34页 |
| 1.4.1 酶分子改造概述 | 第31-32页 |
| 1.4.2 酶稳定性改造 | 第32-33页 |
| 1.4.3 酶催化活性改造 | 第33-34页 |
| 1.5 本研究的目的、意义和主要研究内容 | 第34-35页 |
| 1.5.1 研究目的和意义 | 第34页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第34-35页 |
| 第二章 嗜热真菌特异腐质霉GH3 β-葡萄糖苷酶的多样性及底物结合研究 | 第35-78页 |
| 2.1 引言 | 第35-36页 |
| 2.2 试验材料 | 第36-39页 |
| 2.2.1 菌株、质粒及引物 | 第36页 |
| 2.2.2 酶类及其它生化试剂 | 第36-38页 |
| 2.2.3 培养基 | 第38-39页 |
| 2.2.4 主要仪器 | 第39页 |
| 2.3 试验方法 | 第39-52页 |
| 2.3.1 特异腐质霉第3家族β-葡萄糖苷酶编码基因克隆及序列分析 | 第39-44页 |
| 2.3.2 特异腐质霉第3家族β-葡萄糖苷酶在毕赤酵母GS115中的重组表达 | 第44-47页 |
| 2.3.3 重组β-葡萄糖苷酶HiBgl3A、HiBgl3B、HiBgl3C的酶学性质分析 | 第47-50页 |
| 2.3.4 HiBgl3A和HiBgl3B底物特异性突变体的构建、重组表达及性质测定 | 第50-51页 |
| 2.3.5 β-葡萄糖苷酶HiBgl3C协同纤维素酶糖化效果 | 第51页 |
| 2.3.6 β-葡萄糖苷酶HiBgl3C转糖苷反应 | 第51-52页 |
| 2.4 实验结果与分析 | 第52-75页 |
| 2.4.1 特异腐质霉第3家族β-葡萄糖苷酶编码基因序列分析 | 第52-61页 |
| 2.4.2 特异腐质霉第3家族β-葡萄糖苷酶在毕赤酵母中的表达纯化及SDS-PAGE分析 | 第61页 |
| 2.4.3 特异腐质霉第3家族β-葡萄糖苷酶酶学性质分析 | 第61-68页 |
| 2.4.4 β-葡萄糖苷酶HiBgl3C协同纤维素酶转糖苷反应 | 第68页 |
| 2.4.5 β-葡萄糖苷酶HiBgl3C协同纤维素酶糖化效果 | 第68-70页 |
| 2.4.6 特异腐质霉第3家族β-葡萄糖苷酶结构分析及突变体构建 | 第70-75页 |
| 2.5 讨论 | 第75-77页 |
| 2.6 小结 | 第77-78页 |
| 第三章 嗜热真菌篮状菌GH3 β-葡萄糖苷酶BGL3A的克隆表达及pH稳定性改造 | 第78-107页 |
| 3.1 引言 | 第78-79页 |
| 3.2 实验材料 | 第79-80页 |
| 3.2.1 菌株、质粒及引物 | 第79页 |
| 3.2.2 酶类及其它生化试剂 | 第79页 |
| 3.2.3 培养基 | 第79页 |
| 3.2.4 主要仪器 | 第79-80页 |
| 3.3 实验方法 | 第80-90页 |
| 3.3.0 篮状菌第3家族β-葡萄糖苷酶Bgl3A编码基因克隆及序列分析 | 第80-83页 |
| 3.3.1 篮状菌第3家族β-葡萄糖苷酶Bgl3A在毕赤酵母GS115中的重组表达 | 第83-85页 |
| 3.3.2 篮状菌第3家族β-葡萄糖苷酶Bgl3A在大肠杆菌中的重组表达 | 第85-88页 |
| 3.3.3 重组β-葡萄糖苷酶Bgl3A的酶学性质分析 | 第88页 |
| 3.3.4 Bgl3A pH稳定性突变体的构建、重组表达及性质测定 | 第88页 |
| 3.3.5 Bgl3A原酶和突变体的脱糖基化及PAS染色 | 第88-89页 |
| 3.3.6 Bgl3A原酶和突变体圆二色谱分析 | 第89页 |
| 3.3.7 β-葡萄糖苷酶Bgl3A及其突变体M1协同纤维素酶糖化实验 | 第89-90页 |
| 3.4 实验结果与分析 | 第90-105页 |
| 3.4.1 第3家族β-葡萄糖苷酶Bgl3A编码基因序列分析 | 第90-93页 |
| 3.4.2 重组β-葡萄糖苷酶Bgl3A酶学性质分析 | 第93-97页 |
| 3.4.3 重组β-葡萄糖苷酶Bgl3A糖基化分析及其对pH稳定性的影响 | 第97-99页 |
| 3.4.4 重组β-葡萄糖苷酶Bgl3A pH稳定性突变体的表达及酶学性质分析 | 第99-102页 |
| 3.4.5 重组β-葡萄糖苷酶Bgl3A及其pH稳定性突变体圆二色谱分析 | 第102页 |
| 3.4.6 野生型Bgl3A和突变体M1协同纤维素酶糖化效果 | 第102-105页 |
| 3.5 讨论 | 第105-106页 |
| 3.6 小结 | 第106-107页 |
| 第四章 嗜热真菌篮状菌GH3 β-葡萄糖苷酶BGL3A对纤维二糖催化效率的改造 | 第107-126页 |
| 4.1 引言 | 第107-108页 |
| 4.2 试验材料 | 第108页 |
| 4.2.1 菌株、质粒及引物 | 第108页 |
| 4.2.2 主要试剂 | 第108页 |
| 4.2.4 主要仪器 | 第108页 |
| 4.3 试验方法 | 第108-110页 |
| 4.3.1 β-葡萄糖苷酶Bgl3A同源模建及结构分析 | 第108页 |
| 4.3.2 β-葡萄糖苷酶Bgl3A分子对接分析 | 第108-109页 |
| 4.3.3 β-葡萄糖苷酶Bgl3A催化效率改良突变体设计 | 第109页 |
| 4.3.4 β-葡萄糖苷酶Bgl3A催化效率改良突变体构建、表达与酶学性质分析 | 第109页 |
| 4.3.5 分子动力学模拟及分析 | 第109-110页 |
| 4.4 实验结果与分析 | 第110-124页 |
| 4.4.1 β-葡萄糖苷酶Bgl3A同源模建及结构分析 | 第110-112页 |
| 4.4.2 β-葡萄糖苷酶Bgl3A分子对接分析 | 第112页 |
| 4.4.3 β-葡萄糖苷酶Bgl3A催化效率突变体的设计 | 第112-114页 |
| 4.4.4 β-葡萄糖苷酶Bgl3A催化效率改良突变体酶学性质分析 | 第114-118页 |
| 4.4.5 突变体分子动力学模拟 | 第118-124页 |
| 4.5 讨论 | 第124-125页 |
| 4.6 小结 | 第125-126页 |
| 第五章 总结、创新点和后续研究展望 | 第126-128页 |
| 5.1 总结 | 第126-127页 |
| 5.2 创新点 | 第127页 |
| 5.3 后续研究展望 | 第127-128页 |
| 参考文献 | 第128-141页 |
| 附录一 pEASY-T3 Vector | 第141-142页 |
| 附录二 pET-30A(+) Vector | 第142-143页 |
| 附录三 pPIC9 Vector | 第143-144页 |
| 作者简介及主要发表论文 | 第144页 |
