| 中文摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 引言 | 第13-17页 |
| 第一部分 HSG基因调控COPD大鼠气道Wnt/PCP信号通路的相关性研究 | 第17-47页 |
| 1 实验材料 | 第17-22页 |
| 1.1 实验对象及分组 | 第17页 |
| 1.2 实验主要试剂 | 第17-18页 |
| 1.3 主要仪器及设备 | 第18-20页 |
| 1.4 实验常用溶剂配置 | 第20-22页 |
| 2 实验方法 | 第22-34页 |
| 2.1 大鼠造模 | 第22页 |
| 2.2 造模结束后两组大鼠症状及体征情况 | 第22页 |
| 2.3 大鼠模型鉴定 | 第22-23页 |
| 2.4 细胞培养 | 第23-25页 |
| 2.4.1 成纤维细胞原代培养 | 第23页 |
| 2.4.2 成纤维细胞的鉴定 | 第23-24页 |
| 2.4.3 成纤维细胞的纯化 | 第24页 |
| 2.4.4 细胞传代 | 第24页 |
| 2.4.5 细胞冻存 | 第24-25页 |
| 2.4.6 上清液的收集 | 第25页 |
| 2.4.7 细胞复苏 | 第25页 |
| 2.5 ELISA检测成纤维细胞上清液MMP-9、PDGF、TGF-β1细胞因子表达量 | 第25-27页 |
| 2.6 Western Blot检测成纤维细胞中HSG、RhoA、Daam1蛋白表达量 | 第27-30页 |
| 2.6.1 提取总蛋白、测定蛋白浓度 | 第27-28页 |
| 2.6.2 蛋白样品变性上样及电泳 | 第28-29页 |
| 2.6.3 转膜 | 第29-30页 |
| 2.7 q-PCR检测成纤维细胞中HSG、MMP-9、TGF-β_1、PDGF、RhoA、Daam1的mRNA表达量 | 第30-31页 |
| 2.7.1 提取成纤维细胞总RNA(TriZol原理) | 第30-31页 |
| 2.7.1.1 细胞裂解 | 第30页 |
| 2.7.1.2 液相分离 | 第30-31页 |
| 2.7.1.3 细胞总RNA回收 | 第31页 |
| 2.8 NanoDrop2000及电泳检测总RNA,确定浓度、纯度及完整性 | 第31-32页 |
| 2.8.1 NanoDrop2000检测总RNA的浓度及OD值 | 第31页 |
| 2.8.2 电泳检测总RNA的完整性 | 第31-32页 |
| 2.9 RNA逆转录 | 第32页 |
| 2.10 Real Time PCR反应 | 第32-34页 |
| 3 数据分析 | 第34页 |
| 4 实验结果 | 第34-47页 |
| 4.1 大鼠造模情况、细胞培养、HE染色及成纤维细胞上清液中MMP-9、PDGF、TGF-β_1细胞因子的表达情况 | 第34-40页 |
| 4.1.1 正常组大鼠、COPD组大鼠造模情况 | 第34-35页 |
| 4.1.2 大鼠HE染色结果 | 第35-36页 |
| 4.1.3 正常组大鼠、COPD模型组大鼠成纤维细胞原代培养及鉴定 | 第36-37页 |
| 4.1.4 成纤维细胞上清液MMP-9、PDGF、TGF-β_1标准曲线图及表达情况 | 第37-40页 |
| 4.2 Western Blot检测成纤维细胞中HSG、RhoA、Daam1蛋白表达量情况 | 第40-41页 |
| 4.3 HSG蛋白与MMP-9、TGF-β_1、PDGF、RhoA、Daam1的相关性分析 | 第41-43页 |
| 4.3.1 HSG蛋白与MMP-9、TGF-β_1、PDGF、RhoA、Daam1相关性散点图 | 第41-42页 |
| 4.3.2 HSG蛋白与MMP-9、TGF-β_1、PDGF、RhoA、Daam1相关系数情况 | 第42-43页 |
| 4.4 电泳检测总RNA的完整性 | 第43页 |
| 4.5 HSG、PDGF、TGF-β_1、RhoA基因扩增曲线图及mRNA相对表达量结果 | 第43-47页 |
| 4.5.1 HSG、PDGF、TGF-β_1、RhoA基因扩增情况 | 第43-44页 |
| 4.5.2 HSG、PDGF、TGF-β_1、RhoA基因的mRNA相对表达量情况 | 第44-45页 |
| 4.5.3 HSG与PDGF、TGF-β_1、RhoA基因mRNA相对表达量相关性分析 | 第45页 |
| 4.5.4 HSG基因mRNA表达与PDGF、TGF-β_1、RhoA的相关性散点图 | 第45-46页 |
| 4.5.5 HSG基因与PDGF、TGF-β_1、RhoA的相关系数情况 | 第46-47页 |
| 第二部分 COPD急性加重期患者Wnt/PCP信号通路中RhoA基因与中医证型的相关性研究 | 第47-68页 |
| 1 材料 | 第47-49页 |
| 1.1 实验对象及分组 | 第47页 |
| 1.2 病例诊断标准 | 第47-48页 |
| 1.3 病例纳入标准 | 第48页 |
| 1.4 病例排除标准 | 第48页 |
| 1.5 实验主要试剂 | 第48-49页 |
| 1.6 主要仪器及设备 | 第49页 |
| 1.7 实验常用溶剂配置 | 第49页 |
| 2 实验方法 | 第49-53页 |
| 2.1 血液总RNA的提取(基于TriZol原理) | 第50-51页 |
| 2.1.1 血液裂解 | 第50页 |
| 2.1.2 液相分离 | 第50页 |
| 2.1.3 血液总RNA回收 | 第50-51页 |
| 2.2 NanoDrop2000及电泳检测总RNA,确定浓度、纯度及完整性 | 第51页 |
| 2.2.1 NanoDrop2000检测确定总RNA的浓度及OD值 | 第51页 |
| 2.2.2 电泳检测总RNA的完整性 | 第51页 |
| 2.3 RNA逆转录 | 第51-52页 |
| 2.4 Real Time PCR反应 | 第52-53页 |
| 3 数据处理 | 第53-54页 |
| 4 实验结果 | 第54-60页 |
| 4.1 基本情况比较 | 第54-57页 |
| 4.2 不同证型血液总RNA完整性 | 第57-58页 |
| 4.3 RhoA基因扩增曲线图及其mRNA相对表达量情况 | 第58-59页 |
| 4.3.1 RhoA基因及内参扩增情况 | 第58页 |
| 4.3.2 RhoA基因的mRNA在证型中相对表达量情况 | 第58-59页 |
| 4.4 RhoA基因与COPD急性加重期中医证型相关系数情况 | 第59-60页 |
| 5 讨论 | 第60-68页 |
| 5.1 COPD模型构建 | 第60-61页 |
| 5.2 HSG/Mfn2基因与COPD气道重建 | 第61-62页 |
| 5.3 细胞因子TGF-β_1、PDGF、MMP-9与COPD气道重建 | 第62-63页 |
| 5.4 Wnt/PCP信号通路与COPD气道重建 | 第63-65页 |
| 5.5 HSG与Wnt/PCP信号通路相关性 | 第65页 |
| 5.6 RhoA与COPD急性加重期中医证型诊断 | 第65-68页 |
| 全文总结与展望 | 第68-70页 |
| 参考文献 | 第70-73页 |
| 附录一 缩略语表 | 第73-75页 |
| 附录二 综述 | 第75-87页 |
| 参考文献 | 第83-87页 |
| 附录三 COPD急性加重期中医证型分类收集表 | 第87-88页 |
| 附录四 RhoA基因与COPD急性加重期中医证型的相关性研究知情同意书 | 第88-89页 |
| 附录五 致谢 | 第89-90页 |
| 附录六 个人简历 | 第90页 |
