| 摘要 | 第10-12页 |
| 英文摘要 | 第12-13页 |
| 1 前言 | 第15-23页 |
| 1.1 禽腺病毒概述 | 第15-16页 |
| 1.2 禽腺病毒分类 | 第16页 |
| 1.3 禽腺病毒的生物学特点 | 第16-19页 |
| 1.3.1 禽腺病毒的形态结构和理化特性 | 第16-17页 |
| 1.3.2 禽腺病毒的基因组结构 | 第17-18页 |
| 1.3.3 禽腺病毒主要蛋白及功能 | 第18页 |
| 1.3.4 禽腺病毒病毒复制 | 第18-19页 |
| 1.4 禽腺病毒检测方法 | 第19-22页 |
| 1.4.1 血清学诊断 | 第19-20页 |
| 1.4.2 病毒分离鉴定 | 第20页 |
| 1.4.3 分子生物学技术 | 第20-22页 |
| 1.5 研究目的与意义 | 第22-23页 |
| 2 材料和方法 | 第23-32页 |
| 2.1 鸡胚、载体与菌种 | 第23页 |
| 2.2 酶类与主要生化试剂 | 第23页 |
| 2.3 主要仪器设备 | 第23页 |
| 2.4 FAd V基因组DNA的提取 | 第23-24页 |
| 2.5 标准品的制备 | 第24-27页 |
| 2.5.1 引物 | 第24页 |
| 2.5.2 目的基因片段PCR扩增 | 第24-25页 |
| 2.5.3 目的片段胶回收 | 第25页 |
| 2.5.4 p MD18-T载体与胶回收产物连接 | 第25页 |
| 2.5.5 连接产物的转化 | 第25-26页 |
| 2.5.6 重组质粒PCR鉴定及测序鉴定 | 第26页 |
| 2.5.7 重组质粒的大量制备 | 第26-27页 |
| 2.5.8 标准品浓度计算 | 第27页 |
| 2.6 荧光定量PCR标准曲线的建立 | 第27页 |
| 2.6.1 荧光定量PCR反应体系的优化 | 第27页 |
| 2.6.2 荧光定量PCR反应程序的优化 | 第27页 |
| 2.6.3 标准曲线的构建 | 第27页 |
| 2.7 FAd V荧光定量PCR检测方法的建立 | 第27-28页 |
| 2.7.1 荧光定量PCR反应条件的建立 | 第27-28页 |
| 2.7.2 荧光定量PCR结果判定 | 第28页 |
| 2.8 特异性试验 | 第28-29页 |
| 2.9 敏感性试验 | 第29页 |
| 2.9.1 病毒TCID50测定 | 第29页 |
| 2.9.2 荧光定量PCR检测方法敏感性试验 | 第29页 |
| 2.10 重复性和稳定性试验 | 第29页 |
| 2.11 两种荧光定量PCR检测方法的比较 | 第29-30页 |
| 2.12 FAdV荧光定量PCR检测方法的初步应用 | 第30-32页 |
| 2.12.1 动物实验分组 | 第30页 |
| 2.12.2 荧光定量PCR方法检测感染鸡的排毒 | 第30页 |
| 2.12.3 FAd V在鸡体内的组织分布 | 第30-31页 |
| 2.12.4 应用荧光定量PCR检测临床病料 | 第31-32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-44页 |
| 3.1 FAd V Hexon-1 和 52K基因片段PCR扩增 | 第32页 |
| 3.2 重组质粒的鉴定 | 第32页 |
| 3.3 标准品的制备及拷贝数测定 | 第32-33页 |
| 3.4 FAd V荧光定量PCR检测方法的建立 | 第33-35页 |
| 3.4.1 荧光定量PCR反应最佳条件 | 第33页 |
| 3.4.2 荧光定量PCR标准曲线的建立 | 第33-35页 |
| 3.5 特异性试验 | 第35-36页 |
| 3.6 敏感性试验 | 第36-38页 |
| 3.6.1 FAd V-C，FAd V-D TCID50测定 | 第36页 |
| 3.6.2 荧光定量PCR检测方法敏感性 | 第36-38页 |
| 3.7 重复性和稳定性试验 | 第38页 |
| 3.8 两种FAd V荧光定量PCR检测方法的比较 | 第38-41页 |
| 3.8.1 本研究建立荧光定量PCR检测方法 | 第38-39页 |
| 3.8.2 其他荧光定量PCR检测方法 | 第39-40页 |
| 3.8.3 两种不同的荧光定量PCR检测方法的比较 | 第40-41页 |
| 3.9 FAd V荧光定量PCR检测方法初步应用 | 第41-44页 |
| 3.9.1 荧光定量PCR方法检测感染鸡只排毒 | 第41页 |
| 3.9.2 FAdV在鸡体内的组织分布 | 第41-43页 |
| 3.9.3 FAd V荧光定量PCR方法检测临床病料 | 第43-44页 |
| 4 讨论 | 第44-48页 |
| 4.1 禽腺病毒感染现状 | 第44页 |
| 4.2 禽腺病毒荧光定量PCR检测方法的建立 | 第44-45页 |
| 4.2.1 禽腺病毒荧光定量PCR检测方法的通用性 | 第44-45页 |
| 4.2.2 禽腺病毒荧光定量PCR检测方法的优化 | 第45页 |
| 4.3 禽腺病毒的分离 | 第45-46页 |
| 4.4 鸡感染禽腺病毒带毒及排毒情况 | 第46-48页 |
| 5 结论 | 第48-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-56页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第56页 |
