| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略词表 | 第10-16页 |
| 1 研究背景和基础理论依据 | 第16-42页 |
| 1.1 哺乳动物胚胎发育过程概述 | 第16-19页 |
| 1.2 胚胎干细胞是研究胚胎发育的重要体外模型 | 第19-27页 |
| 1.2.1 胚胎干细胞是一种多能干细胞 | 第19页 |
| 1.2.2 人源胚胎干细胞和鼠源胚胎干细胞的差异 | 第19-21页 |
| 1.2.3 维持胚胎干细胞多能性的机理 | 第21-24页 |
| 1.2.4 胚胎干细胞的定向分化 | 第24-27页 |
| 1.3 胚胎癌细胞是癌变的早期胚胎细胞 | 第27-29页 |
| 1.3.1 胚胎癌细胞的来源 | 第27-28页 |
| 1.3.2 胚胎癌细胞与胚胎干细胞的异同 | 第28页 |
| 1.3.3 胚胎癌细胞是胚胎发育和胚胎期肿瘤干细胞的一种研究模型 | 第28-29页 |
| 1.4 Oct4在胚胎干细胞和胚胎癌细胞中发挥关键作用 | 第29-40页 |
| 1.4.1 Oct 4的发现 | 第29页 |
| 1.4.2 Oct 4的异构体及假基因 | 第29-31页 |
| 1.4.3 Oct4在胚胎发育过程中的动态变化 | 第31-32页 |
| 1.4.4 Oct4的多种构象 | 第32-34页 |
| 1.4.5 Oct4与Sox2互作研究现状 | 第34-37页 |
| 1.4.6 Oct4蛋白翻译后修饰 | 第37-40页 |
| 1.5 研究目标 | 第40-42页 |
| 2 实验材料与方法 | 第42-65页 |
| 2.1 实验材料 | 第42-48页 |
| 2.1.1 细胞系 | 第42页 |
| 2.1.2 感受态细胞 | 第42页 |
| 2.1.3 质粒 | 第42页 |
| 2.1.4 常用试剂 | 第42-44页 |
| 2.1.5 常用实验仪器 | 第44-45页 |
| 2.1.6 引物列表 | 第45-48页 |
| 2.2 实验方法 | 第48-65页 |
| 2.2.1 POU5F1 shRNA+POU5F1-K156变异体病毒载体的构建 | 第48-53页 |
| 2.2.2 原核表达载体的构建 | 第53页 |
| 2.2.3 原核蛋白的表达,纯化及鉴定 | 第53-55页 |
| 2.2.4 细胞的复苏,培养和传代及冻存 | 第55-56页 |
| 2.2.5 细胞转染 | 第56-57页 |
| 2.2.6 慢病毒的制备及感染细胞 | 第57-58页 |
| 2.2.7 Western blot | 第58页 |
| 2.2.8 DNA凝胶阻滞实验(EMSA) | 第58-59页 |
| 2.2.9 蛋白免疫共沉淀(Co-IP) | 第59-60页 |
| 2.2.10 生物素标记DNA免疫共沉淀实验 | 第60-61页 |
| 2.2.11 染色质免疫共沉淀(ChIP) | 第61-62页 |
| 2.2.12 免疫荧光 | 第62页 |
| 2.2.13 碱性磷酸酶染色 | 第62-63页 |
| 2.2.14 总RNA提取,cDNA的合成及实时定量PCR | 第63-64页 |
| 2.2.15 统计分析 | 第64-65页 |
| 3 Oct4-T235磷酸化促进胚胎癌细胞的自我更新 | 第65-75页 |
| 3.1 引言 | 第65页 |
| 3.2 在ECC和ESC中,Oct4-T235位均可被Akt1磷酸化修饰 | 第65-67页 |
| 3.3 Oct 4直接调控AKT1的转录 | 第67-70页 |
| 3.4 Oct4-T235位磷酸化修饰抑制ECC向外胚层分化 | 第70-73页 |
| 3.5 总结与讨论 | 第73-75页 |
| 4 Oct4-Sox2关键互作位点的发现和鉴定 | 第75-84页 |
| 4.1 引言 | 第75页 |
| 4.2 分子模拟Oct4-Sox2互作界面及重要的互作位点 | 第75-76页 |
| 4.3 体外重组Oct4蛋白的翻译后修饰反应 | 第76-77页 |
| 4.4 在膀胱癌中发现Oct4-K156N体细胞突变 | 第77-78页 |
| 4.5 Oct4-K156调控Oct4-Sox2互作 | 第78-82页 |
| 4.6 总结与讨论 | 第82-84页 |
| 5 Oct4-K156调控多能干细胞向中内胚层分化 | 第84-102页 |
| 5.1 引言 | 第84页 |
| 5.2 Oct4-K156调控ECC中Oct4蛋白的稳定性及其细胞定位 | 第84-90页 |
| 5.2.1 Oct4-K156N突变破坏了K156位与D212位之间的盐桥 | 第84-86页 |
| 5.2.2 Oct4-K156调控ECC中Oct4蛋白的稳定性 | 第86-89页 |
| 5.2.3 Oct4-K156调控Oct4蛋白的细胞定位 | 第89-90页 |
| 5.3 Oct4-K156位点调控多能干细胞的中内胚层分化 | 第90-92页 |
| 5.4 Oct4-K156调控多能性干细胞的上皮-间充质转化现象 | 第92-94页 |
| 5.5 Oct4-K156调控细胞分化的信号通路 | 第94-97页 |
| 5.6 总结与讨论 | 第97-102页 |
| 6 讨论与展望 | 第102-104页 |
| 参考文献 | 第104-121页 |
| 作者简介 | 第121-122页 |
| 致谢 | 第122-124页 |
