| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 第一章 综述 | 第12-31页 |
| 1.1 邻位连接技术概述 | 第12-18页 |
| 1.1.1 邻位连接技术 | 第12-16页 |
| 1.1.2 邻位连接技术的应用 | 第16-18页 |
| 1.2 荧光共振能量转移 | 第18-20页 |
| 1.3 蛋白大分子的检测 | 第20-25页 |
| 1.3.1 前列腺特异性抗原 | 第20-21页 |
| 1.3.2 p53及p53突变体 | 第21-23页 |
| 1.3.3 FEN1 和 DNA2 | 第23-25页 |
| 1.4 小分子化合物的检测 | 第25-29页 |
| 1.4.1 瘦肉精在国内外的应用历史及现状 | 第25-27页 |
| 1.4.2 瘦肉精的检测方法研究 | 第27-29页 |
| 立题依据和意义 | 第29-31页 |
| 第二章 建立用于生物大分子的spPLA检测方法及其临床应用研究 | 第31-73页 |
| 2.1 材料和方法 | 第31-52页 |
| 2.1.1 核酸序列 | 第31-32页 |
| 2.1.2 主要试剂和仪器 | 第32-35页 |
| 2.1.3 主要缓冲液配方 | 第35-36页 |
| 2.1.4 总RNA的提取和纯化 | 第36-37页 |
| 2.1.5 总RNA完整性的检测 | 第37页 |
| 2.1.6 cDNA第一链的合成 | 第37页 |
| 2.1.7 p53表达载体的构建 | 第37-42页 |
| 2.1.8 p53突变体表达载体的构建 | 第42-43页 |
| 2.1.9 p53R175H重组蛋白的表达与纯化 | 第43-46页 |
| 2.1.10 p53R175H重组蛋白的ELISA检测 | 第46页 |
| 2.1.11 生物素标记的双链DNA的制备和纯化 | 第46-47页 |
| 2.1.12 抗体核酸探针的制备 | 第47-48页 |
| 2.1.13 制备免疫微球用以捕捉PSA | 第48页 |
| 2.1.14 处理qPCR管吸附抗体 | 第48-49页 |
| 2.1.15 免疫PCR分析 | 第49页 |
| 2.1.16 免疫微球固相邻位连接技术 | 第49-50页 |
| 2.1.17 以管壁为固定相的spPLA技术 | 第50-51页 |
| 2.1.18 环介导等温扩增法分析 | 第51-52页 |
| 2.2 结果与分析 | 第52-70页 |
| 2.2.1 总RNA的完整性检测 | 第52-53页 |
| 2.2.2 p53目的基因的PCR扩增 | 第53-54页 |
| 2.2.3 p53连接产物的菌落PCR和限制性酶切的鉴定 | 第54-55页 |
| 2.2.4 测序结果 | 第55页 |
| 2.2.5 重组蛋白的纯度及免疫杂交检测 | 第55-56页 |
| 2.2.6 抗体-核酸探针的制备和优化 | 第56-59页 |
| 2.2.7 比较免疫PCR与spPLA对PSA的检测 | 第59-60页 |
| 2.2.8 LAMP与spPLA结合检测PSA | 第60-63页 |
| 2.2.9 管壁spPLA优化包被抗体和邻位探针的用量 | 第63-66页 |
| 2.2.10 管壁spPLA检测PSA和野生型p53 | 第66-67页 |
| 2.2.11 突变体p53的检测 | 第67-70页 |
| 2.3 讨论 | 第70-73页 |
| 第三章 建立用于小分子化合物的竞争性spPLA检测方法及其在食品安全检测中的应用研究 | 第73-91页 |
| 3.1 材料和方法 | 第73-79页 |
| 3.1.1 核酸序列 | 第73页 |
| 3.1.2 主要试剂和仪器 | 第73-75页 |
| 3.1.3 主要缓冲液配方 | 第75页 |
| 3.1.4 重氮化反应制备Cle-BSA偶联物 | 第75-76页 |
| 3.1.5 Cle-BSA和Rac-BSA偶联物及其对应抗体的生物素标记 | 第76页 |
| 3.1.6 准备猪肉组织提取液 | 第76页 |
| 3.1.7 邻位探针的制备 | 第76-77页 |
| 3.1.8 制备免疫微球 | 第77页 |
| 3.1.9 竞争免疫微球spPLA检测Cle和Rac | 第77-79页 |
| 3.1.10 间接竞争ELISA检测瘦肉精 | 第79页 |
| 3.2 结果与分析 | 第79-89页 |
| 3.2.1 优化免疫微球和邻位探针的用量 | 第79-82页 |
| 3.2.2 间接竞争ELISA检测瘦肉精 | 第82-84页 |
| 3.2.3 竞争免疫微球spPLA检测Cle和Rac | 第84-89页 |
| 3.3 讨论 | 第89-91页 |
| 第四章 应用荧光共振能量转移技术检测FEN1和DNA2酶活性研究 | 第91-99页 |
| 4.1 材料和方法 | 第91-93页 |
| 4.1.1 核酸序列 | 第91页 |
| 4.1.2 主要试剂和仪器 | 第91-92页 |
| 4.1.3 主要缓冲液配方 | 第92页 |
| 4.1.4 FEN1和DNA2及其突变体的表达和纯化 | 第92页 |
| 4.1.5 标记有Eu~(3+)的酶底物的制备 | 第92页 |
| 4.1.6 应用FRET检测FEN1和DNA2活性 | 第92-93页 |
| 4.2 结果与分析 | 第93-97页 |
| 4.2.1 DNA2及其突变体的纯度检测 | 第93页 |
| 4.2.2 确定酶底物中Flap链的使用量 | 第93-94页 |
| 4.2.3 核酸酶反应动力学研究 | 第94-95页 |
| 4.2.4 应用FRET研究FEN1和DNA2酶活性 | 第95-97页 |
| 4.3 讨论 | 第97-99页 |
| 主要成果与创新点 | 第99-100页 |
| 参考文献 | 第100-119页 |
| 致谢 | 第119-121页 |
| 发表论文 | 第121页 |
