| 摘要 | 第3-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 第一章 前言 | 第13-18页 |
| 1.1 Rho蛋白 | 第13-14页 |
| 1.2 ROCK蛋白及其下游信号分子 | 第14-15页 |
| 1.3 RhoA/ROCK信号通路与细胞成脂作用 | 第15-17页 |
| 1.4 本课题的研究思路 | 第17-18页 |
| 第二章 RhoA14V基因过表达的C3H10T1/2稳定细胞系的建立 | 第18-30页 |
| 2.1 引言 | 第18页 |
| 2.2 材料 | 第18-22页 |
| 2.2.1 细胞株 | 第18页 |
| 2.2.2 质粒与菌株 | 第18页 |
| 2.2.3 主要实验耗材 | 第18-19页 |
| 2.2.4 主要试剂 | 第19-20页 |
| 2.2.5 主要实验仪器 | 第20-21页 |
| 2.2.6 主要溶液配制 | 第21-22页 |
| 2.3 方法 | 第22-27页 |
| 2.3.1 细胞冻存 | 第22页 |
| 2.3.2 细胞复苏及培养 | 第22-23页 |
| 2.3.3 Plat E细胞培养 | 第23页 |
| 2.3.4 质粒转染 | 第23页 |
| 2.3.5 质粒抽提 | 第23-24页 |
| 2.3.6 pMSCV逆转录病毒上清收集 | 第24-25页 |
| 2.3.7 Killing curve及细胞感染 | 第25页 |
| 2.3.8 建立RhoAG14V稳定细胞系 | 第25页 |
| 2.3.9 实时荧光定量PCR | 第25-27页 |
| 2.3.10 Western Blot | 第27页 |
| 2.3.11 统计分析 | 第27页 |
| 2.4 结果 | 第27-29页 |
| 2.5 讨论 | 第29-30页 |
| 第三章 过表达RhoAG14V对C3H10T1/2细胞成脂过程中的形态及甘油三酯含量的影响 | 第30-36页 |
| 3.1 引言 | 第30页 |
| 3.2 材料 | 第30-32页 |
| 3.2.1 主要试剂 | 第30-31页 |
| 3.2.2 主要仪器 | 第31页 |
| 3.2.3 主要溶液配制 | 第31-32页 |
| 3.3 方法 | 第32-33页 |
| 3.3.1 细胞成脂诱导 | 第32页 |
| 3.3.2 油红O染色鉴定 | 第32页 |
| 3.3.3 统计分析 | 第32-33页 |
| 3.4 结果 | 第33-35页 |
| 3.4.1 油红O染色观察细胞形态的变化 | 第33-34页 |
| 3.4.2 脂肪细胞中甘油三酯含量的测定 | 第34-35页 |
| 3.5 讨论 | 第35-36页 |
| 第四章 过表达RhoAG14V对C3H10T1/2细胞RhoA/ROCKⅡ信号通路的影响 | 第36-54页 |
| 4.1 引言 | 第36-37页 |
| 4.2 材料 | 第37-41页 |
| 4.2.1 主要试剂 | 第37-38页 |
| 4.2.2 主要仪器 | 第38-39页 |
| 4.2.3 主要溶液配制 | 第39-40页 |
| 4.2.4 RT-qPCR引物 | 第40页 |
| 4.2.5 抗体 | 第40-41页 |
| 4.3 方法 | 第41-44页 |
| 4.3.1 实时荧光定量PCR | 第41页 |
| 4.3.2 Western Blot | 第41-43页 |
| 4.3.3 统计分析 | 第43-44页 |
| 4.4 结果 | 第44-50页 |
| 4.4.1 总RNA的提取及样品鉴定 | 第44页 |
| 4.4.2 过表达RhoA14V对C3H10T1/2细胞成脂相关基因的影响 | 第44-46页 |
| 4.4.3 过表达RhoA14V对C3H10T1/2细胞RhoA/ROCK信号通路关键蛋白的影响 | 第46-50页 |
| 4.5 讨论 | 第50-54页 |
| 第五章 过表达RhoAG14V基因对C3H10T1/2细胞成脂过程中细胞骨架的影响 | 第54-60页 |
| 5.1 引言 | 第54页 |
| 5.2 材料 | 第54-55页 |
| 5.2.1 主要试剂 | 第54-55页 |
| 5.2.2 主要仪器 | 第55页 |
| 5.2.3 主要溶液配制 | 第55页 |
| 5.3 方法 | 第55-56页 |
| 5.4 结果 | 第56-58页 |
| 5.5 讨论 | 第58-60页 |
| 总结 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 附录 | 第71页 |
