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ClassⅠ新城疫弱毒的毒力演化及自噬在新城疫病毒感染肿瘤细胞中的作用

摘要第1-8页
Abstract第8-10页
英文缩略表第10-17页
第一章 文献综述第17-26页
 1. 细胞自噬概述第17-20页
   ·概念及分类第17-18页
   ·细胞自噬的发生及调控机制第18-20页
 2. 病毒感染引起细胞自噬的发生机制第20-21页
   ·病毒受体介导的细胞自噬第20页
   ·内质网应激介导的细胞自噬第20-21页
 3. 细胞自噬能抗病毒感染第21-22页
   ·自噬是细胞抵抗病毒感染的固有防线第21-22页
   ·细胞自噬可以改变病毒抗原的递呈方式第22页
 4. 细胞自噬能促进病毒感染第22-24页
   ·自噬泡可以成为病毒的复制场所第23-24页
   ·细胞自噬有助于病毒基因的复制和表达第24页
 5. 结语第24-26页
第二章 Duck/JS/10 的分离及全因组测序第26-42页
 1. 前言第26-27页
 2. 材料与方法第27-32页
   ·材料第27页
   ·方法第27-32页
     ·病毒分离鉴定及扩增保存第27-28页
     ·分离株的毒力鉴定第28页
     ·分离株全基因组序列的扩增及测定第28-30页
     ·分离株的基因组序列拼接及分析第30-32页
 3. 结果第32-39页
   ·Duck/JS/10 的生物学特性鉴定第32页
   ·Duck/JS/10 全基因组测序与拼接第32-34页
   ·Duck/JS/10 全基因组遗传进化分析及基因型确定第34-35页
   ·Duck/JS/10 内部基因分析第35-38页
   ·Duck/JS/10 外部基因分析第38-39页
   ·Duck/JS/10 非编码区分析第39页
 4. 讨论第39-42页
第三章 Duck/JS/10 株与 La Sota 株的免疫原性比较第42-51页
 1. 前言第42-43页
 2. 材料与方法第43-46页
   ·材料第43页
   ·方法第43-46页
     ·病毒扩增保存第43页
     ·病毒 EID50测定第43-44页
     ·病毒 TCID50测定第44页
     ·兔抗新城疫高免血清制备第44页
     ·交叉血凝抑制试验第44页
     ·交叉中和试验第44-45页
     ·交叉保护试验第45页
     ·统计分析第45-46页
 3. 结果第46-49页
   ·病毒扩增及特性鉴定第46页
   ·交叉血凝抑制结果第46页
   ·交叉中和结果第46-48页
   ·交叉保护结果第48-49页
 4. 讨论第49-51页
第四章 新城疫病毒弱毒株的毒力进化第51-66页
 1. 前言第51-52页
 2. 材料与方法第52-55页
   ·材料第52页
   ·方法第52-55页
     ·鸡胚连续传代第52-53页
     ·气囊连续传代第53页
     ·传代株的序列测定及分析第53页
     ·传代株的毒力测定第53页
     ·Duck/JS/10 系列传代株在不同攻途径下的致病力差异第53页
     ·Duck/JS/10 系列传代株在体内增殖情况比较第53-54页
     ·Duck/JS/10 系列传代株在体内组织分布情况比较第54-55页
 3. 结果第55-63页
   ·气囊传代测序结果第55-56页
   ·鸡胚传代测序结果第56-57页
   ·Duck/JS/10-A10 和 Duck/JS/10-E20 的全基因组测序及比较第57-60页
   ·Duck/JS/10 系列传代株的体内增殖比较第60-61页
   ·Duck/JS/10 系列传代株的组织嗜性差异第61-62页
   ·不同攻毒途径下 Duck/JS/10- A10 的致病力差异第62-63页
 4. 讨论第63-66页
第五章 Duck/JS/10 株反向遗传平台的初步建立第66-78页
 1. 前言第66-67页
 2. 材料与方法第67-73页
   ·材料第67页
   ·方法第67-73页
     ·引物设计与合成第67-68页
     ·目的片段扩增及鉴定第68页
     ·Duck/JS/10 全长转录载体的构建第68-71页
     ·Duck/JS/10 辅助质粒的构建第71-72页
     ·Duck/JS/10 辅助质粒功能的鉴定第72-73页
     ·Duck/JS/10 的拯救第73页
 3. 结果第73-76页
   ·Duck/JS/10 各片段 RT-PCR 扩增结果第73-74页
   ·含 Duck/JS/10 全长 cDNA 转录载体的鉴定第74页
   ·Duck/JS/10 辅助质粒的构建第74-75页
   ·Duck/JS/10 辅助质粒的功能鉴定第75-76页
 4. 讨论第76-78页
第六章 新城疫病毒诱导肿瘤细胞发生自噬第78-93页
 1. 前言第78-79页
 2. 材料与方法第79-83页
   ·材料第79-80页
   ·方法第80-83页
     ·GFPLC3-Ⅱ 重组质粒的构建第80-81页
     ·GFPLC3-Ⅱ 重组质粒在细胞内表达和检测第81页
     ·病毒感染及病毒滴度测定第81-82页
     ·间接免疫荧光(Indirect fluorescence assay,IFA)第82页
     ·蛋白免疫印迹(Western blot)第82-83页
     ·透射电镜观察细胞内的超微结构第83页
     ·数据统计与分析第83页
 3. 结果第83-90页
   ·GFPLC3-Ⅱ 质粒的构建及鉴定第83-85页
   ·GFPLC3-Ⅱ 质粒功能的鉴定第85-86页
   ·NDV 感染肿瘤细胞可以诱导自噬发生第86-90页
 4. 讨论第90-93页
第七章 细胞自噬促进新城疫病毒复制第93-104页
 1. 前言第93-94页
 2 材料与方法第94-95页
   ·材料第94页
   ·方法第94-95页
     ·细胞活性测定第94-95页
     ·siRNA 基因沉默第95页
     ·western blot第95页
     ·病毒滴度测定第95页
 3 结果第95-101页
   ·NDV 诱导自噬的相关细胞信号通路检测第95-96页
   ·自噬药物对细胞毒性的影响第96-97页
   ·自噬药物对自噬的影响测定第97-98页
   ·自噬水平对病毒的影响第98页
   ·siRNA 干扰对自噬相关基因的沉默第98-99页
   ·siRNA 干扰对细胞毒性的影响第99-100页
   ·自噬基因沉默后对病毒复制的影响第100-101页
 4 讨论第101-104页
第八章 全文总结第104-105页
参考文献第105-114页
致谢第114-115页
作者简介第115页

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