摘要 | 第1-8页 |
Abstract | 第8-10页 |
英文缩略表 | 第10-17页 |
第一章 文献综述 | 第17-26页 |
1. 细胞自噬概述 | 第17-20页 |
·概念及分类 | 第17-18页 |
·细胞自噬的发生及调控机制 | 第18-20页 |
2. 病毒感染引起细胞自噬的发生机制 | 第20-21页 |
·病毒受体介导的细胞自噬 | 第20页 |
·内质网应激介导的细胞自噬 | 第20-21页 |
3. 细胞自噬能抗病毒感染 | 第21-22页 |
·自噬是细胞抵抗病毒感染的固有防线 | 第21-22页 |
·细胞自噬可以改变病毒抗原的递呈方式 | 第22页 |
4. 细胞自噬能促进病毒感染 | 第22-24页 |
·自噬泡可以成为病毒的复制场所 | 第23-24页 |
·细胞自噬有助于病毒基因的复制和表达 | 第24页 |
5. 结语 | 第24-26页 |
第二章 Duck/JS/10 的分离及全因组测序 | 第26-42页 |
1. 前言 | 第26-27页 |
2. 材料与方法 | 第27-32页 |
·材料 | 第27页 |
·方法 | 第27-32页 |
·病毒分离鉴定及扩增保存 | 第27-28页 |
·分离株的毒力鉴定 | 第28页 |
·分离株全基因组序列的扩增及测定 | 第28-30页 |
·分离株的基因组序列拼接及分析 | 第30-32页 |
3. 结果 | 第32-39页 |
·Duck/JS/10 的生物学特性鉴定 | 第32页 |
·Duck/JS/10 全基因组测序与拼接 | 第32-34页 |
·Duck/JS/10 全基因组遗传进化分析及基因型确定 | 第34-35页 |
·Duck/JS/10 内部基因分析 | 第35-38页 |
·Duck/JS/10 外部基因分析 | 第38-39页 |
·Duck/JS/10 非编码区分析 | 第39页 |
4. 讨论 | 第39-42页 |
第三章 Duck/JS/10 株与 La Sota 株的免疫原性比较 | 第42-51页 |
1. 前言 | 第42-43页 |
2. 材料与方法 | 第43-46页 |
·材料 | 第43页 |
·方法 | 第43-46页 |
·病毒扩增保存 | 第43页 |
·病毒 EID50测定 | 第43-44页 |
·病毒 TCID50测定 | 第44页 |
·兔抗新城疫高免血清制备 | 第44页 |
·交叉血凝抑制试验 | 第44页 |
·交叉中和试验 | 第44-45页 |
·交叉保护试验 | 第45页 |
·统计分析 | 第45-46页 |
3. 结果 | 第46-49页 |
·病毒扩增及特性鉴定 | 第46页 |
·交叉血凝抑制结果 | 第46页 |
·交叉中和结果 | 第46-48页 |
·交叉保护结果 | 第48-49页 |
4. 讨论 | 第49-51页 |
第四章 新城疫病毒弱毒株的毒力进化 | 第51-66页 |
1. 前言 | 第51-52页 |
2. 材料与方法 | 第52-55页 |
·材料 | 第52页 |
·方法 | 第52-55页 |
·鸡胚连续传代 | 第52-53页 |
·气囊连续传代 | 第53页 |
·传代株的序列测定及分析 | 第53页 |
·传代株的毒力测定 | 第53页 |
·Duck/JS/10 系列传代株在不同攻途径下的致病力差异 | 第53页 |
·Duck/JS/10 系列传代株在体内增殖情况比较 | 第53-54页 |
·Duck/JS/10 系列传代株在体内组织分布情况比较 | 第54-55页 |
3. 结果 | 第55-63页 |
·气囊传代测序结果 | 第55-56页 |
·鸡胚传代测序结果 | 第56-57页 |
·Duck/JS/10-A10 和 Duck/JS/10-E20 的全基因组测序及比较 | 第57-60页 |
·Duck/JS/10 系列传代株的体内增殖比较 | 第60-61页 |
·Duck/JS/10 系列传代株的组织嗜性差异 | 第61-62页 |
·不同攻毒途径下 Duck/JS/10- A10 的致病力差异 | 第62-63页 |
4. 讨论 | 第63-66页 |
第五章 Duck/JS/10 株反向遗传平台的初步建立 | 第66-78页 |
1. 前言 | 第66-67页 |
2. 材料与方法 | 第67-73页 |
·材料 | 第67页 |
·方法 | 第67-73页 |
·引物设计与合成 | 第67-68页 |
·目的片段扩增及鉴定 | 第68页 |
·Duck/JS/10 全长转录载体的构建 | 第68-71页 |
·Duck/JS/10 辅助质粒的构建 | 第71-72页 |
·Duck/JS/10 辅助质粒功能的鉴定 | 第72-73页 |
·Duck/JS/10 的拯救 | 第73页 |
3. 结果 | 第73-76页 |
·Duck/JS/10 各片段 RT-PCR 扩增结果 | 第73-74页 |
·含 Duck/JS/10 全长 cDNA 转录载体的鉴定 | 第74页 |
·Duck/JS/10 辅助质粒的构建 | 第74-75页 |
·Duck/JS/10 辅助质粒的功能鉴定 | 第75-76页 |
4. 讨论 | 第76-78页 |
第六章 新城疫病毒诱导肿瘤细胞发生自噬 | 第78-93页 |
1. 前言 | 第78-79页 |
2. 材料与方法 | 第79-83页 |
·材料 | 第79-80页 |
·方法 | 第80-83页 |
·GFPLC3-Ⅱ 重组质粒的构建 | 第80-81页 |
·GFPLC3-Ⅱ 重组质粒在细胞内表达和检测 | 第81页 |
·病毒感染及病毒滴度测定 | 第81-82页 |
·间接免疫荧光(Indirect fluorescence assay,IFA) | 第82页 |
·蛋白免疫印迹(Western blot) | 第82-83页 |
·透射电镜观察细胞内的超微结构 | 第83页 |
·数据统计与分析 | 第83页 |
3. 结果 | 第83-90页 |
·GFPLC3-Ⅱ 质粒的构建及鉴定 | 第83-85页 |
·GFPLC3-Ⅱ 质粒功能的鉴定 | 第85-86页 |
·NDV 感染肿瘤细胞可以诱导自噬发生 | 第86-90页 |
4. 讨论 | 第90-93页 |
第七章 细胞自噬促进新城疫病毒复制 | 第93-104页 |
1. 前言 | 第93-94页 |
2 材料与方法 | 第94-95页 |
·材料 | 第94页 |
·方法 | 第94-95页 |
·细胞活性测定 | 第94-95页 |
·siRNA 基因沉默 | 第95页 |
·western blot | 第95页 |
·病毒滴度测定 | 第95页 |
3 结果 | 第95-101页 |
·NDV 诱导自噬的相关细胞信号通路检测 | 第95-96页 |
·自噬药物对细胞毒性的影响 | 第96-97页 |
·自噬药物对自噬的影响测定 | 第97-98页 |
·自噬水平对病毒的影响 | 第98页 |
·siRNA 干扰对自噬相关基因的沉默 | 第98-99页 |
·siRNA 干扰对细胞毒性的影响 | 第99-100页 |
·自噬基因沉默后对病毒复制的影响 | 第100-101页 |
4 讨论 | 第101-104页 |
第八章 全文总结 | 第104-105页 |
参考文献 | 第105-114页 |
致谢 | 第114-115页 |
作者简介 | 第115页 |