| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7页 |
| 缩略词表 | 第8-14页 |
| 第1章 前言 | 第14-31页 |
| 1.1 小鼠作为生物学研究模型的优势 | 第14-19页 |
| 1.2 唾液腺 | 第19-21页 |
| 1.3 肝脏与代谢 | 第21-26页 |
| 1.3.1 肝脏与脂肪合成代谢 | 第23-25页 |
| 1.3.2 肝脏与葡萄糖代谢 | 第25-26页 |
| 1.4 Akt信号通路 | 第26-28页 |
| 1.5 mLeg1介绍 | 第28-29页 |
| 1.6 分泌蛋白和其糖苷化修饰 | 第29页 |
| 1.7 本研究的内容、目的和意义 | 第29-31页 |
| 第2章 材料与方法 | 第31-47页 |
| 2.1 小鼠 | 第31-32页 |
| 2.1.1 小鼠品系及饲养 | 第31页 |
| 2.1.2 小鼠唾液收集 | 第31页 |
| 2.1.3 唾液腺细胞原代培养 | 第31-32页 |
| 2.1.4 小鼠葡萄糖耐受实验 | 第32页 |
| 2.2 癌细胞系的培养和转染 | 第32-33页 |
| 2.2.1 癌细胞系的培养 | 第32-33页 |
| 2.2.2 细胞转染 | 第33页 |
| 2.2.3 mLeg1信号激活和抑制 | 第33页 |
| 2.3 DNA相关实验 | 第33-35页 |
| 2.3.1 基因克隆 | 第33-34页 |
| 2.3.2 小鼠基因型鉴定 | 第34-35页 |
| 2.3.3 小鼠基因组DNA提取 | 第35页 |
| 2.4 蛋白质相关实验 | 第35-38页 |
| 2.4.1 蛋白提取 | 第35页 |
| 2.4.2 蛋白免疫印迹(Western blot) | 第35-36页 |
| 2.4.3 蛋白免疫荧光 | 第36页 |
| 2.4.4 蛋白免疫共沉淀 | 第36-37页 |
| 2.4.5 mLeg1蛋白的柱层析纯化 | 第37页 |
| 2.4.6 受体酪氨酸激酶(RTK)筛选 | 第37-38页 |
| 2.4.7 糖链切除 | 第38页 |
| 2.4.8 CM-DIL标记蛋白 | 第38页 |
| 2.5 RNA相关实验 | 第38-41页 |
| 2.5.1 RNA提取 | 第38-39页 |
| 2.5.2 RNA逆转录 | 第39页 |
| 2.5.3 荧光定量PCR | 第39-40页 |
| 2.5.4 Northern印迹分析 | 第40-41页 |
| 2.6 其他相关实验 | 第41-42页 |
| 2.6.1 小鼠血指标检测 | 第41-42页 |
| 2.6.2 HE染色 | 第42页 |
| 2.6.3 HE染色 | 第42页 |
| 2.7 化学试剂及培养基配方 | 第42-44页 |
| 2.8 本课题相关引物序列 | 第44-47页 |
| 第3章 斑马鱼Leg1的N70位存在糖苷化修饰,且该修饰对于其功能至关重要 | 第47-53页 |
| 3.1 斑马鱼Leg1存在糖苷化修饰 | 第47-48页 |
| 3.2 Leg1的糖苷化修饰在第70位的天冬酰胺上 | 第48-50页 |
| 3.3 糖苷化修饰缺陷的Leg1b丧失分泌能力 | 第50-52页 |
| 3.4 糖苷化修饰缺陷的Leg1a丧失对斑马鱼肝脏发育的调控能力 | 第52页 |
| 3.5 小结与讨论 | 第52-53页 |
| 第4章 mleg1表达谱分析 | 第53-56页 |
| 4.1 mleg1 RNA表达谱 | 第53-54页 |
| 4.2 mLeg1蛋白表达谱 | 第54-55页 |
| 4.3 小结与讨论 | 第55-56页 |
| 第5章 mleg1基因敲除小鼠 | 第56-60页 |
| 5.1 mleg1~(fl/fl)小鼠打靶载体的构建 | 第56页 |
| 5.2 mleg1~(fl/fl)稳定遗传小鼠的基因型鉴定及获取 | 第56-57页 |
| 5.3 mleg1全身敲除小鼠的获取 | 第57-59页 |
| 5.4 小结 | 第59-60页 |
| 第6章 mleg1敲除小鼠唾液腺发育与功能并无明显异常 | 第60-65页 |
| 6.1 mleg1敲除不影响小鼠唾液腺的形态结构 | 第60页 |
| 6.2 mleg1~(Δ/Δ)小鼠的唾液腺细胞的分布与野生型小鼠无明显差别 | 第60-62页 |
| 6.3 mleg1~(Δ/Δ)小鼠的唾液腺细胞增殖和凋亡与野生型小鼠没有明显差别 | 第62-63页 |
| 6.4 mleg1~(Δ/Δ)小鼠的唾液腺保持完好的分泌能力 | 第63-64页 |
| 6.5 小结与讨论 | 第64-65页 |
| 第7章 mleg1敲除小鼠代谢紊乱 | 第65-68页 |
| 7.1 mleg1敲除小鼠部分血指标出现异常 | 第65-66页 |
| 7.2 mleg1~(Δ/Δ)小鼠肝脏中葡萄糖转运蛋白glut2表达升高 | 第66-67页 |
| 7.3 小结与讨论 | 第67-68页 |
| 第8章 mleg1(leg1)受饥饿诱导表达 | 第68-75页 |
| 8.1 mleg1受饥饿诱导表达 | 第68-69页 |
| 8.2 斑马鱼leg1基因的表达也受饥饿诱导 | 第69-70页 |
| 8.3 AMPK的激活可以诱导Leg1表达 | 第70-72页 |
| 8.4 饥饿状态下,mleg1~(Δ/Δ)小鼠肝脏中p53水平增加 | 第72-73页 |
| 8.5 小结与讨论 | 第73-75页 |
| 第9章 mLeg1调节Akt的活性 | 第75-82页 |
| 9.1 mLeg1的敲除抑制Akt的活性 | 第75-76页 |
| 9.2 mleg1~(Δ/Δ)小鼠肝脏Akt磷酸化的减少并不是由于PTEN的活性增加所致 | 第76-77页 |
| 9.3 mLeg1能够促进Akt的磷酸化 | 第77-80页 |
| 9.3.1 唾液腺细胞分泌上清可以诱导HepG2细胞Akt磷酸化 | 第77页 |
| 9.3.2 唾液腺细胞分泌上清可以诱导mleg1~(Δ/Δ)小鼠肝脏Akt的磷酸化 | 第77-78页 |
| 9.3.3 纯化唾液腺蛋白所得的mLeg1能诱导Akt的磷酸化 | 第78-80页 |
| 9.4 小结与讨论 | 第80-82页 |
| 第10章 mLeg1激活Akt依赖EGFR信号通路 | 第82-86页 |
| 10.1 mLeg1激活Akt依赖PI3K通路 | 第82-83页 |
| 10.2 mLeg1通过RTK激活Akt | 第83页 |
| 10.3 mLeg1激活EGFR | 第83-84页 |
| 10.4 mLeg1激活Akt依赖EGFR的激活 | 第84-85页 |
| 10.5 mleg1~(Δ/Δ)小鼠唾液腺egf的表达未受影响 | 第85页 |
| 10.6 小结和讨论 | 第85-86页 |
| 第11章 mLeg1与EGFR受体存在互作 | 第86-88页 |
| 11.1 mLeg1诱导EGFR和Akt的磷酸化非常迅速 | 第86页 |
| 11.2 mLeg1与EGFR存在互作 | 第86-87页 |
| 11.3 小结与讨论 | 第87-88页 |
| 第12章 小鼠唾液腺表达的mLeg1调节肝脏功能的机理研究 | 第88-92页 |
| 12.1 外源性mLeg1影响肝脏Akt的磷酸化水平 | 第88页 |
| 12.2 mLeg1从口腔分泌,经过血液到达肝脏从而影响肝脏功能 | 第88-90页 |
| 12.3 小结和讨论 | 第90-92页 |
| 第13章 结论与讨论 | 第92-96页 |
| 13.1 结论 | 第92-94页 |
| 13.2 讨论 | 第94-96页 |
| 作者简介 | 第96-97页 |
| 致谢 | 第97-100页 |
| 参考文献 | 第100-109页 |
